常用作实验室工具的 ELISA 试剂盒，其操作看似简易，可要想获取稳定且可靠的数据，就得对每个环节有精准的把控。从试剂盒的挑选直至结果判定解读，每一步都隐含着门道。此篇文章将会从实际操作的角度出发，分享几个保障实验质量的关键要点。
如何选对ELISA试剂盒
市面上ELISA试剂盒种类繁多，在进行选择时，不能仅仅只依据价格来判断。首先，必须要清晰明确实验的目的，到底是检测抗原，还是检测抗体，样本的类型究竟是血清，还是细胞上清，亦或是组织匀浆。重点需关注试剂盒的检测灵敏度以及特异性，这两个参数直接决定了能不能从复杂的样本当中准确地捕捉到目标分子。与此同时，一定要仔细核对试剂盒的检测范围，保证目标物的浓度处于标准曲线的线性区间之内，不然的话，就可能会出现样本值低于或者高于检测限的尴尬状况。
怎样保证检测准确性
进行ELISA检测时，加样步骤作为操作里最易出错的环节，应使用calibrated移液器并定期给予校准，实验准确性可是其生命线。孵育时间以及温度必须严格依照说明书去执行，恒温箱的温度波动不应当超过±0.5℃。洗板的操作需要精准把握好度，洗得太轻非特异性吸附就会高，而洗得要是太重那么可能会把已结合的抗原抗体复合物给冲掉。强烈建议每个样本都要做复孔，并且设置空白对照、阴性对照以及阳性对照，这可是评估实验是否有效的一种硬指标。
试剂盒储存注意什么
引发实验失败的隐形杀手乃是试剂盒储存方式不当，收到试剂盒之后，要在第一时间去检查其中的组分，并且依据说明书将其进行分门别类的存放，未用完的预包被板条必须要连同干燥剂一起密封好之后，方能放回铝箔袋，放置在2至8℃的环境当中，标准品以及质控品一般情况下需要在-20℃C的环境里进行长期保存，反复的冻融将会显著地降低它们的生物活性，建议把它们分装成单次使用的量，显色液和终止液对于光线较为敏感，需要进行避光保存，所有试剂在使用之前都应当恢复到室温，但是千万要忌讳反复地冷热交替。
如何避免交叉反应干扰
在样本基质之中，干扰物质乃是致使假阳性或者假阴性出现的常见缘由。就血清或者血浆样本而言，溶血、脂血亦或是黄疸样本会颇为严重地干扰显色反应，这样的样本最好重新去采集。当遭遇高背景或者非特异性显色之时，可以考虑在稀释液里增加封闭剂的浓度，或者对样本稀释倍数予以优化。另外，洗涤液里的吐温浓度同样是关键参数呢，浓度过低洗涤效果不好，过高的话则有可能破坏抗原抗体结合。借助预实验探寻出最契合当前样本类型的操作条件，常常能够解决绝大部分干扰问题。
