兔原代细胞，是从兔组织直接对其分离从而获得的细胞群体，它最大程度上保留了体内细胞的原始特征，是生命科学研究里不可或缺的工具，相比细胞系，它们更能够对兔源组织的生理状态如实进行反映，在药物筛选、毒性测试等等等这些领域展现出独特价值，掌握兔原代细胞的分离还有培养技术，对实验成功起到至关重要的很关键作用。

兔原代细胞分离方法

兔原代细胞分离的关键之处在于无菌操作以及酶消化时间的精准把控，就拿兔肾原代细胞来说，先取新鲜的兔肾组织，将其剪碎，之后加入0.1%胶原酶，于37℃的水浴环境中进行30至45分钟的消化，在这期间每隔10分钟就要摇晃一回 ，要是消化过度就会对细胞活性造成损伤，而消化不足的话细胞得率会很低，终止消化之后用100目滤网进行过滤，经过离心收集细胞就能得到单细胞悬液。

兔原代细胞培养条件

兔的原代细胞，对于培养环境是比较敏感的，会推荐使用专用的培养基从而添加10%的胎牛血清。培养箱的条件，要稳定在37℃以及5% CO₂，湿度进行保持在95%以上。细胞贴壁的速度是较为慢的，接种之后48小时之内，要避免去移动培养瓶。首次换液是在72小时的时候进行，目的是去除未贴壁的细胞还有碎片。要注意去观察培养基pH的变化，偏黄意味着代谢过旺，需要及时进行更换。

兔原代细胞鉴定技巧

通常采用形态学观察跟免疫荧光染色相结合的方式来鉴定兔原代细胞纯度，比如说兔肾原代细胞呈现出典型的上皮样铺路石状排列，然而兔成纤维细胞呈现的是长梭形状。进一步能够够用角蛋白抗体也就是CK - 18或者波形蛋白抗体来进行特异性染色，阳性率超越95%才可以视为合格。流式细胞术同样能够用来检测细胞表面标志物，进而确保不存在其他细胞污染。

兔原代细胞传代注意

通常情况下，兔原代细胞一般仅仅能够传代三至五代，一旦超过这个代数，就会出现衰老或者表型丢失的情况。传代的时机需要选择在细胞融合度达到百分之八十的时候，要是传代过早，就会降低产量，要是传代过晚，那细胞就会老化。要用百分之零点零五的胰酶 -EDTA 在室温下消化一到两分钟，轻轻拍打瓶壁，看到细胞变圆脱落时就终止消化。按照一比二的比例进行分瓶，传代之后的前两天需要避免剧烈摇晃，要保持静置培养。