作为生物研究基础技术的细胞培养，在操作期间常常会碰到诸如污染、生长缓慢这类的问题。要是能够掌握正确的培养方法，那么是可以有效地提高实验成功率的。本文对几条实用经验进行了总结，得以帮助大家减少弯路行程。

细胞培养污染怎么预防

细胞培养里，污染可是最让人头疼的问题，其中细菌、真菌或者支原体的污染常常是因为操作的时候疏忽了，或者环境不干净所致。建议每次操作之前，先用75%酒精擦拭超净台，然后让紫外灯照射30分钟。培养基以及试剂需要分装后来使用，防止反复去打开瓶子。能够在培养液里加入双抗（青霉素 - 链霉素），不过长期使用有可能会产生耐药性，平常更得注重无菌操作的习惯。

培养基如何正确选择

不同种类的细胞，对于营养的需求，存在着很大的差异。贴壁生长的细胞，常用的是DMEM高糖培养基。而悬浮细胞，适合的则是RPMI - 1640。血清的浓度，也是需要进行调整的。一般情况下，10%的胎牛血清，能够满足大部分细胞的生长需求。原代培养的时候，需要添加生长因子。比如EGF或者FGF。要注意查看培养基的有效期。配制培养基时，要严格按照说明书，加入碳酸氢钠来调节pH值。当颜色呈现为樱桃红的时候，才是正常的。

传代操作有哪些技巧

细胞铺满瓶底达80%左右之际，便需传代，借助PBS轻轻漂洗两次，以此去掉死细胞以及血清残留，胰酶消化的时间十分关键，于倒置显微镜下见到细胞变圆、间隙增大之时便可终止，吹打之时得轻柔，防止产生气泡，按照1:3或者1:4的比例接种，新瓶要预先用基质包被，传代后的第二天观察贴壁情况，要是漂浮细胞多，表明消化过度或者有胰酶残留。

培养条件怎样优化

对细胞状态产生直接影响的是温度以及CO₂浓度，将恒温培养箱设定为37℃，5%的CO₂浓度对于多数细胞系而言最为适宜，湿度需维持在95%以上，以此来防止培养基出现蒸发的情况。要避免频繁去开关培养箱门，不然会致使温湿度产生波动。需定期对箱体水盘展开清洁，所使用的是无菌蒸馏水并且添加了抑菌剂。像有些细胞，例如肿瘤细胞，其需要低氧环境，可将氧气调至3%，这就需要专用的三气培养箱。

在细胞培养期间，你能不能说清楚，究竟是哪一个环节，其实是最容易被人忽视掉的呢？欢迎大家在评论区那儿，去分享一下你自身的经验呀。