最为基础且关键的技术之一，在生命科学研究里边是细胞培养，它看起来好像简单，然而实际操作当中到处都是门道，从无菌环境的维护起，到培养基的选择，每一项细节都会对细胞的生长状态造成影响，下面结合日常实验里的常见场景，分享一些实用经验。

细胞培养如何避免污染

cell培养里，污染可是最叫人头疼的问题，细菌、真菌以及支原体都有可能毫无声息地侵入进来。操作之前，一定要用75%酒精擦拭超净工作台与双手，所有的耗材都得经过高温高压灭菌。实验进行过程中，要避免大声讲话语或者快速去移动，以防气流把微生物携带进培养皿。建议每隔两周就彻底清理一回培养箱，并且定期检测培养液是不是出现浑浊或者pH发生变化，一旦发觉污染，马上进行隔离处理。

定期对培养箱的水盘予以检查，往其中添加适量的抑菌剂，还要让无菌水保持充足的状态。要是同一批细胞出现反复污染的情况，那就得对移液器、培养瓶以及血清的质量展开检查，在必要的时候更换供应商。要养成对于每次操作细节进行记录的习惯，以便于追踪污染的来源之处。

培养基怎么选才对

各式各样的细胞类型，针对营养的需求有着极大差异，一旦选错培养基，就会致使细胞生长迟缓，甚至走向死亡。常见那种基础的培养基包含DMEM，还有RPMI-1640以及MEM，贴壁细胞一般而言需要DMEM，悬浮细胞则是更适配RPMI-1640。查看细胞说明书、或者文献所给出的推荐，这是首要步骤，要是不确定，能够先开展小规模对比实验，去观察细胞形态以及增殖速率。

在血清浓度方面同样是很关键的，对于大部分细胞系而言会采用10%的胎牛血清来使用，然而部分较为敏感的细胞却需要将血清浓度降低至5%或者升高到20%。要留意血清批次之间存在的差异，建议进行批量采购时选用同一批次。添加谷氨酰胺以及双抗能够起到提升稳定性的作用，然则抗生素并不适宜长时间进行使用，不然会掩盖轻微污染的情况。

传代操作要注意什么

当细胞密度处在80%至90%这个范围时，就需要进行传代，因为传代时机对细胞活性有着直接影响。要是过早实施传代，那产量便会降低，而倘若过晚展开传代，就会致使细胞老化或者发生脱落。在对贴壁细胞搞消化操作时，先要用PBS清洗来把残留血清给去除掉，接着加入适量的胰酶，于显微镜下观察到细胞变圆就要立刻终止消化，要是时间过长，就会对细胞膜造成损伤。

使细胞脱离附着物时动作得轻柔些，防止出现大量气泡，因气泡破裂所生成的剪切力会致使一部分细胞死亡。传代的比例一般是1比3或者1比4，新接种的细胞需均匀地摊开，放进培养箱之后24小时内别频繁去观察。每一次传代都要记录代数，原代细胞以及有限细胞系在超过一定代数后性能会降低，建议尽早冻存早期的代次。