生命科学实验之中，细胞培养属于极为基础且尤其核心的技术种类之一。无论是针对细胞行为展开研究，还是进行生物制品的生产，又或者是药物筛选工作，全都离不开稳定可靠状态下的细胞培养操作。身为一名长时间于实验室开展工作的技术人员，我深切知晓初学者们所面临的困惑以及挑战，接下来分享几个具备实用性质的要点。

细胞培养设备清单

从事细胞培养时，超净工作台、CO2培养箱以及倒置显微镜，此三者乃细胞培养当中极具关键意义的核心设备，超净工作台能够为无菌的操作提供相应区域，建议每隔一个月针对其洁净度实行监测，CO2培养箱可维持5% 的CO2以及37℃的恒定温度环境，需要定期对气体浓度以及温度予以校准。除此之外，离心机、移液器、细胞计数板同时还有液氮罐同样是日常工作里必不可少之地。在挑选设备之际先行重点考虑精度跟稳定性事项，就像移液器每年都应该进行一次校准，防止加样误差对细胞状况营造影响。

如何避免细胞污染

细胞培养时，最常见致使失败的原因乃是污染，其主要被划分成细菌污染、真菌污染以及支原体污染这几种类型。对于预防污染而言，需从操作的诸多细节之处着手：在开展实验以前，应当先用75%的酒精去擦拭台面，接着给予紫外照射30分钟的处理；而在进行操作的时候，手臂一定得避开通向开放培养瓶的跨越动作，所使用的耗材要采用无菌包装并且不能超过规定的期限。能够往培养基里面添加1%的双抗以此抑制细菌，然而要是长期进行使用的话，有可能会产生耐药性，故而建议定期去做无菌检测，一旦发现存在污染情况，就要马上丢弃并且彻底对培养箱进行消毒处理。

培养基怎么选

好多不同的细胞，对营养需要的差别可大了去了，常常会用到的基础培养基，包含着DMEM、RPMI - 1640以及MEM。一种那些如成纤维细胞般会贴壁的细胞，比较适合高糖的DMEM，另一些像淋巴细胞那样混悬着的细胞，常常采用RPMI - 1640。血清可是培养基里关键的一种添加物，其中胎牛血清是最常被应用的，其浓度一般来讲是10%。当去挑选培养基的时候，得去核对细胞说明书，要留意L - 谷氨酰胺和碳酸氢钠是不是新鲜加入的，配好之后在4℃的环境下避光保存，两周之内得用完。

细胞传代操作要点

当细胞在培养瓶底生长至满满当当百分之八十的时候，便需要进行传代操作，先要把旧的培养基吸除掉，接着使用PBS清洗两遍，以此将血清残留给去除掉，之后再加入百分之零点二五的胰酶，使其覆盖整个瓶底，在显微镜下面观看细胞演变成圆形、细胞间隙变大的时候，立刻终止消化，吹打的次数要控制在二十次以内，避免给细胞造成损伤，传代的比例一般是一比二直至一比四，接种以后摇晃均匀放入培养箱，注意记录细胞的代次，超过三十代的老化细胞应当及时复苏新的批次。