用来进行PCR扩增实验的试剂盒，是分子生物学实验室里常用的工具，它借助聚合酶链式反应达成DNA片段的快速扩增。我对于这类试剂盒的基本认知是，它的核心主要在于提供稳定又高效的酶体系，还有优化后的缓冲液以及精确无误的反应组分，而这些直接决定了扩增实验到底能不能成功。下面依据实际经验，来谈谈挑选以及使用过程当中的关键点。

PCR试剂盒怎么选

选择PCR试剂盒，首先得看酶的热启动性能，热启动Taq酶能够有效地避免进行非特异性扩增，特别是在复杂模板当中表现得十分突出，比如在做基因组DNA扩增的时候，普通酶容易产生弥散条带，然而热启动酶能够显著地提升特异性，与此同时还要关注该试剂盒是否就包含dNTPs、Mg2+等这样的组分，全预混液可是能简化操作步骤的，还会减少加样误差。

试剂盒由不同厂家生产，其扩增效率以及保真度存有差异，针对需要进行克隆测序的实验而言，应当挑选具高保真酶的试剂盒。常规检测的话，能够选用普通的Taq酶。此外，试剂盒的兼容性也是十分重要的，举例来说，是不是适配你所用PCR仪的升降温速度，是不是需要对循环参数作出调整。建议先去查阅产品说明，或者进行小量试用。

PCR试剂盒使用注意

在使用试剂盒之前，一定要认真仔细地读完说明书，留意各个组分各自的，用于储备保存的条件。大体上来说，酶这类和引物这般，需要在零下20摄氏度的环境温度里进行储备保存，假如反复进行冰冻再化冻的操作，会使酶其活性降低，故而建议将其分开进行装盛以便于使用。展开配制反应体系的时候，要在冰块之上进行操作，并且严格严谨地坚决避免发生污染情况，采用带有过滤芯的枪头以及专门专用的加样区域，从而防止气溶胶出现交叉污染现象。

加样的顺序通常是先加进去水，接着加缓冲液，然后加dNTPs，最后才加模板以及酶。模板DNA的纯度还有浓度会对角直接产生影响扩增效率，过量的模板会对反应起到抑制作用。建议去设置阳性对照以及阴性对照，用来验证试剂盒和操作流程的可靠性。退火温度需要依据引物Tm值进行优化，能够使用梯度PCR功能快速地找到最佳温度。

PCR扩增效率因素

致使PCR扩增效率受到影响的主要因素涵盖模板质量、引物设计、循环参数以及试剂盒组分稳定性，模板内含有的蛋白质、有机溶剂或者金属离子杂质会对酶活性产生抑制作用，所以提取DNA之后最好进行那种目的在于提高纯度的操作，引物二聚体或者发夹结构会造成扩增失败的结果，设计引物的时候需要避开互补序列，并且要将GC含量控制在40%至60%的范围之内。

循环次数一旦过多，就会积累非特异性产物，一般而言，25至35个循环就可以了。延伸时间需要依据目标片段长度来设定，通常每kb需要设定30至60秒。试剂盒中的Mg2+浓度是关键所在？过低会致使产物少，过高则会引发非特异性条带。要是扩增结果不理想，那么可以尝试调整退火温度或者更换更具高效性的试剂盒。