如何挑选合适的ELISA试剂盒

挑选ELISA试剂盒，首先得查看检测靶标以及样本类型，确定好待测样品究竟是血清，还是细胞上清，亦或是组织匀浆，之后再去匹配试剂盒说明书里的验证样本列表。不同品牌针对同一靶标的抗体对有可能不一样，优先挑选经过天然样本验证的产品，防止仅仅依靠重组蛋白来做质控。此外，灵敏度、检测范围同样要及实验目的相对应，定量实验需要宽范围以及低检测限，定性实验反而更看重特异性。

ELISA实验常见问题有哪些

洗涤不充分，或者非特异性结合，会酿就高背景那堪称典型的问题之一，这就需要加大洗涤的次数，或者延长浸泡的时间这般去处理。抗体失活，又或者孵育温度出现偏差，会致使无信号这种典型问题的产生，那就得去查验试剂保存的条件以及温育的步骤。加样误差，或者板间条件不一致，会造成重复性差的这种典型状况，建议运用多通道移液器，并促使每次操作时间保持一致。每次开展实验的时候，都应当设置阳性对照、空白对照，以此助力快速定位出现异常的环节。

操作步骤关键点要注意什么

加样的顺序务必保持固定，以此来避免样本于室温下放置过长时间进而致使降解。洗板的时候要垂直拍干，不要拿纸巾直接去接触孔底，以防纤维吸附对数值产生干扰。显色所需要的时间要严格依照说明书来执行，过显会造成假阳性的情况，不足则将会降低灵敏度。终止液加入之后应当在30分钟以内完成读数，原因在于颜色会随着时间而衰减。另外，不同批次的试剂盒不要进行混用，尤其是酶标抗体以及底物液，哪怕是相同货号也有可能存在批间差。

如何判断试剂盒质量是否可靠

看待标准曲线的 R² 值大于 0.99 与否之外还要着重留意低值质控品的回收率处于 80% - 120% 之间，可以选取一份已知浓度的实际样本开展稀释线性验证，要是稀释倍数所对应的检测值呈线性下降，那么说明试剂盒在您的样本基质里表现稳定，另外一个有效方法是比对相同靶标的 ELISA 和蛋白印迹结果，相关性良好便证明试剂盒特异性强，购买之前查阅同类实验室的发表文章，查看他们常用哪个品牌，这是最为贴近实际的筛选方式。