上周六的晚上，时间是十点多，朋友老马给我发来了一条语音，其语气之中带着明显的兴奋之情，说道：“那个项目终于通过啦！整两个月都在折腾我。”老马在一家第三方检测机构任职，担任技术主管一职，其专门负责针对食品之中添加剂含量进行分析。他所说的那个项目，所运用的核心工具乃是比色法试剂盒。
这篇文章有着价值，它能够告知你一个真实的实验室工作者，如何从反复出现失误、数据产生偏差、团队提出质疑，再到最后寻找到稳定且可使用的比色法试剂盒的整个过程。要是你也常常与比色法有接触，或者正因为数据波动幅度大、标准曲线难以做好而感到苦恼，那么下面这五千多字的内心经历路程，值得你花费一些时间去看完。
比色法试剂盒稳定性差怎么办
由老马所在并且曾在去年底承接了一批样品的实验室，其目的在于就要对其中几种添加剂的含量进行测定。依照常规流程，他们挑选了某一品牌的比色法试剂盒。老马跟我讲，在那段日子里，每天早上七点他就到达实验室，而他做的第一件事情是开通分光光度计来进行预热。
但是，问题却迅速地随之而至了。那是同一批的样品，由同一个人来进行操作，然而上午所测出来的结果，跟下午测出来的结果相比，竟然能够相差出百分之十五。于是，老马对试剂的保存温度，进行了反复的检查，对显色时间，也进行了精心的查看，对比色皿的清洁度，同样进行了再三的审视，甚至还把移液枪送去做了校准。可是，该做的排查工作都已经展开了，然而数据却依旧并不顺从要求；每个小分句后皆有标点符号。
那会儿他特别困惑，比色法试剂盒稳定性欠佳这个问题究竟出在了哪儿。随后他寻找到了厂家的技术支撑，对方问了这么一句：“你们所使用的试剂盒批次号是多少？”老马这才察觉到，他手上有着两个批次的盒子，显色剂的溶解度存在着显著的差异。
这件事情使得他清楚了一个道理，比色法的试剂盒稳定性欠佳，但其不一定是操作方面所导致的问题，极有可能是不同批次的试剂自身就存在着波动。自那之后，他形成了一个习惯，每当新开启一批盒子的时候，首先会使用标准品去跑完一整个流程，进而确认曲线斜率与之前批次不存在些许明显差错，然后才会正式进行上样。
比色法试剂盒操作繁琐怎么解决
老马解决了批次稳定性的问题后，又碰到了新麻烦，他们实验室日均处理样品量在于八十个到一百二十个彼此之间，然而传统的比色法试剂盒的操作步骤多之又多，光是加上样环节要卡牢恰当时间，再加上混匀环节要掐准正确时间还不够，还得加上静置环节要精准规划时间，显色的环节务必把时间掐准，比起颜色也同样要精确把时间算控制好，各个步骤都要严格卡时间。
在去年十二月中旬挑出的一个周三，老马曾给我展示过他的实验记录本。就在那天，他需要测定四十八个样品，针对每个样品都要做两个平行，再算上标准曲线点以及质控样物，总共会有一百二十多个反应管。仅仅加样这一环节，就耗费了差不多两个小时，期间还得时刻留意着计时器，而且不同步骤所对应的显色时间竟然是不一样的。
当年老马开玩笑讲：“我好似流水线上的工人，只是我的工位是超净台罢了。”他着手思索，比色法试剂盒操作繁杂的状况有无优化的法子呢。他尝试过批量加样，使用多通道移液器，提前配好工作液，然而步骤多终究是步骤多，不管怎样优化都节省不了太多时间。
今年一月初时转机出现了，他前往参加一个行业交流会，在会上碰到了来自另一个实验室的同行。这位同行告知他，他们实验室已在大部分常规项目方面，将比色法替换成了预装填试剂的微板形式。老马回来之后进行了相关查看，从而发现确实存在厂家做出了改进，也就是把试剂预先分装到微孔板里，如此一来用户仅需添加样品以及显色剂，步骤减少了近乎一半。
比色法试剂盒灵敏度不够如何提升
有句话老马曾跟我讲颇实际：“实施比色法时分那种情况而言，不怕其步骤数量多这般状况，只怕抵达该当得检出相应结果的那个时候却没法获取检出结果。”于他所接手过来的那一批次样品里头，存在着几个目标物的预期浓度这种情况恰好是处于试剂盒检测下限临近那一带地方。运用常规常用的比色法试剂盒去进行操作，信号值跟空白对照之间没办法拉开形成差距这样的情形。
今年春节来临前的那两周时间，他始终在就这件事情持续较劲。为了这件事，他尝试了延长显色的时长，提高反应的温度，加大样品的数量，凡是能够想出的办法他都去尝试。曾经有一回，他将显色时间从二十分钟延长至四十分钟，结果信号值确实呈现出上升的态势，然而空白值也随之升高，最终信噪比几乎没有得到改善。
然后，他转变了一种思绪，鉴于检测的灵敏程度不足够，所以，就去更换一款自身灵敏程度更高的比色法试剂盒产品。他对三四个品牌的产品使用说明进行了对比，发觉同样是针对同一个指标开展检测，有的盒子检测下限能够达成零点五个ppm，而有的却仅仅只能达到两个ppm。他挑选了检测下限最低的那一款再度进行操作，这一回目标物的信号终于能够跟空白显著区分开来。
最大的收获这件事给予他的是，不要在一款试剂盒上执着地死磕，若参数不匹配的话就果断去更换。比色法试剂盒的灵敏度乃是被设计而成的，并非依靠操作的优化便能够实现突破的。
比色法试剂盒标曲做不好怎么办
今年三月的时候，老马所在的实验室迎来了一位刚毕业的新人。这位新人首次独自开展操作那个涉及比色法的试剂盒，然而标准曲线做了整整三天都未能成功做出来。之后，老马将这件事情当作了一个具有典型性的案例加以复盘。
新人应他要求，将操作的整个过程进行了演示，之后经查发现，问题存在于标准品的稀释那方面。新人采用的是序列稀释这种方法，每一个试管，都是从上个试管里头吸取溶液，而后再进行稀释，把溶液转移到下一个试管的。该方法本身不存在什么问题，可是，若移液枪的精度达不到要求，或者溶液混匀得不够彻底充分，那么误差便会一级一级地逐渐增大直到放大。最终做出来的标准曲线，R平方值连零点九都达不到。
老马为新人改换了一种做法，采用同一个母液，分别去配制每个浓度点的标准品，这意味着，对于每个点的稀释都是彼此独立的，并不依赖前一个点，虽说稍微会耗费一点试剂，不过误差不会出现累积，重新进行了一遍操作后，标准曲线的R平方值径直达到了零点九九八。
他另外归纳出了一项小窍门，那就是，实施比色法试剂盒的标准曲线操作之际，最低浓度的那个点跟最高浓度的那一个点之间的倍数，较适宜的情形是不要超出一百倍这份数值范围。要是动态范围过于宽泛，处于中间位置的那些点便容易显现出偏离的状况。
比色法试剂盒干扰物质怎么排除
四月时，老马那支团队承接了一个水样检测项目，此项目颇为复杂。水样的基质状况繁杂，其中含有多种不同的金属离子以及有机质。运用比色法试剂盒进行检测完毕之后，所得到的结果显著偏高，而且多次反复进行检测，其结果均呈现偏高态势。
是他判断为基质干扰，比色法的原理乃是基于显色反应，倘若样品当中的其它成分也可以跟显色剂发生反应，又或者使反应体系的pH值出现改变，便会产生假阳性，老马那时做了两组对照，一组是由纯水配制而成的标准品，另一组是运用样品基质配制的标准品（标准加入法），两组的结果差异极为显著，这证实了他的判断。
他在查阅资料以后，于样品前处理该环节增添了一步固相萃取操作进而先将干扰物质予以去除，随后运用比色法试剂盒展开测定，结果瞬间就恢复正常了。老马后来在他们实验室的内部培训期间专门针对这件事情进行了讲述，要求所有人员在遭遇复杂基质样品之际，务必要率先开展基质加标回收实验，在确认不存在明显干扰之后方可正式实施测试。
比色法试剂盒如何判断试剂变质
今年五月上旬，老马在整理试剂冰箱时翻出一盒放置快一年的比色法试剂盒。其保质期还有两个月，然而他不敢直接使用。随后他给我来电称，这种状况极为常见——试剂虽未过期，可颜色已然与新买的有所不同了。
他究竟是怎样去判断试剂是不是变质的呢，方法实际上并非复杂。他会首先开展一次外观检查，正常的工作液理应是澄清着透明的，要是出现沉淀、浑浊或者颜色显著加深，大概率已然变质了。要是外观不存在问题，他会运用标准品做一次单点验证，去测一个已知浓度的标准品，查看回收率是不是在百分之九十到百分之一百一十之间。
老马讲了另外一种更为严格的举措：留存每一批次试剂盒初次使用时刻的标准曲线数据。在后续使用之际，要是标准曲线的斜率或者截距与历史数据之间的偏差超出百分之十，就算质控样处于规定范围当中，他依旧会对这一批次的数据持有保留看法。这样的做法尽管繁杂，然而对于有着高要求的项目而言是极为必要的没错。
比色法试剂盒哪个品牌性价比高
最后的时候聊起来，必然会有人质问老马，比色法试剂盒当中哪个品牌具备较高性价比。老马于实验室工作长达八年时光，所使用过的品牌数目不少于十个。他的观点是，并非仅仅去看单个价格，而是要计算综合成本。
他列举了一个事例，存在这样一个品牌的试剂盒，其单价较为低廉，可是试剂的有效期限仅仅为六个月，并且在开封之后仅仅能够存放两周，他们所拥有的样品数量并不多，往往一盒试剂直至过期都无法用完，经过计算，实际上的成本反而要比另外一个有效期为一年、开封之后能够稳定存放两个月的品牌更高。
还有一项关键成本是重测率，老马曾使用过一款价格低廉的比色法试剂盒，各批次之间有较大波动，进行质量控制时的样本常常超出标准范围，频繁需要整批重新检测，重新检测所耗费的不光是试剂，还有时间方面的成本以及人力板块的成本，随后更换了稳定性更佳的试剂盒，尽管单个单价提高了百分之三十，然而重测率从百分之十五下降到百分之三以下，综合成本反倒有所降低。
老马所提供的建议为，在挑选比色法试剂盒之际，向厂家索要若干批次的质控报告，以此查看批次之间的差异究竟有多大。另外，询问一下交货的周期以及库存的情况，切莫等到急需使用之时才发觉已经断货了。
去年底起始至今年五月为止，老马的这段经历，前前后后折腾了一小半年时间。起始于一个出现翻车状况的项目，最终摸索出了一套具备实用性质且可靠的方法论。他曾讲过一句话，我对那句话印象颇为深刻，那句话内容是：“做实验这般事情，在许多情形下并非是技术存在不足，而是工具未能选妥当。”。
那作为一种堪称经典的分析方法的比色法，其稳定性与可靠性在极大程度上是取决于试剂盒自身的质量以及选择的。老马曾经踩过的坑，你有可能正在踩；他所找到的办法，你或许能够直接加以运用。
要是你认定这篇文章于你有益处，欢迎将其收藏起来，或者转发给实验室当中同样遭受比色法困扰的同事。同时也欢迎关注我的账号，后续会持续不断地分享更多实验室工作里的实战经验。
