搞科研的都懂，ELISA试剂盒看似简单，用起来却常出问题

我有个朋友叫老赵，在上海浦东一家生物技术公司做研发主管。

他们所在的团队，主要从事细胞因子检测方面的工作，而ELISA试剂盒，乃是在日常工作过程中，与之打交道最为频繁的工具。

上个月，我前往张江，去找他一块儿吃饭，他一坐下，便开始叹气，声称最近被那个试剂盒折腾得相当够呛。

有个人和我转述，别看ELISA的实验步骤就是仅有几项步骤，可实际实际操作进行这项实验时，结果会出现漂移现象，背景会过高，标曲其线的线性也很差，各种各样麻烦性的问题会交替不断出现。

我问他到底怎么回事，他就给我讲了近三个月踩坑的经历。

才听完，我便察觉到，这般的坑，实质上几乎是每一个在从事科研相关工作的人都极有可能会碰到的，鉴于此，我随之将他所经历的故事予以整理，期望着以此可为大家带来一定的助益，起到一定的作用。

同一个项目，前后两批试剂盒结果竟然对不上

老赵所在的公司，在去年的时候，承接了某一项特定的委托，这项委托的内容是，要对几十份样本当中的三种炎症因子进行检测。

开始之时，他所持用的乃是实验室平常常用的某一进口品牌，于前面的两个批次开展操作之后，所获取的数据呈现出极为美观的态势，CV值均处于百分之八这个范围以内。

在今年的三月份，他们对一批样本进行了补充，随后，又订购了与之前货号相同的新一批次的试剂盒。

标曲跑出来的结果是，R平方仅仅为0.92，然而之前的批次却能够达成0.99以上的数值。

更奇怪的是，质控品的实测值比标称值低了将近百分之四十。

老赵觉得这属于操作范畴的问题，于是让两个进行实验的人员分别各自去再次做一次，然而最终得到的结果居然完全一样。

他与厂家的技术支撑取得联系，对方声称批次之间存在正常波动，给出了重新拟合标曲的建议。

在进行重新拟合操作之后，样本检测所得到的值，相较于历史数据降低了，降低的幅度接近一半，如此一来，整个项目所呈现出的趋势，就全都无法对上了。

科研ELISA试剂盒批次差异大怎么办

老赵着手对这个问题展开认真的研究，他翻阅查看了过去两年的有关实验的记录，发现在那当中那个品牌实际上一直存在着批次方面的波动情况，只是在这之前这种状况并没有像现在这样严重。

他通过上网去查找资料，并且针对同行询问了一圈，结果发现批次差异乃是ELISA试剂盒所存在的普遍的问题。

起到关键作用的原因在于，试剂盒当中存有的抗体对属于生物来源，检测蛋白是生物来源，酶结合物同样是生物来源，而且不同批次在进行生产时的过程很难达成完全一样的状态。

有些厂家质控标准比较松，批间差允许到百分之十五甚至更高。

老赵讲，之前他从来没有专门去留意过批间差这个参数，一直认为大品牌理应是稳定的。

那批存在问题的试剂盒的质检报告被他翻了出来，他从中发现，批间差所写的数值是百分之十二 ，然而，之前使用起来状况良好的批次的批间差却是百分之六。

差了整整一倍，结果自然对不上。

这时他才弄明白，挑选试剂盒，不可以仅仅只看品牌以及灵敏度，而批间差，方是展开长期实验能够重复的关键所在。

如何判断ELISA试剂盒质量，不能只看说明书

正当五月中旬的时候，老赵作了一个决定，那就是去尝试更换一个品牌。他吩咐采购的时候，同时找来了三家具备供应能力的机构，从那里拿回了五种不一样品牌的，用于科学研究方面的ELISA试剂盒，以此来进行相互之间的对比。

今次他变得机灵了，并非仅仅瞧说明书里所讲的灵敏度范畴，却是着重去看那几个关键指标。

首先是关于标曲的线性范围，其一，有着这样的要求，其二，R平方必须处于不低于0.995的之上状态，其三，以及最高点与最低点之间得存在足够宽间距的动态区间。

第二点所涉及的是回收率，采用样本基质加标的方式，此情形下，测定值与理论值之间的偏差，必须处于正负百分之十的范围以内。

首先是第三点，关乎稀释线性，要将高浓度的样本，去进行梯度稀释操作，而后查看检测值，是否能够呈现成比例下降的情况。

排在第四的是批内以及批间精密度，批内CV小于百分之八且批间CV小于百分之十二才被认定为合格。

他花了两周时间，用同一批样本同时跑这五种试剂盒。

有意思的是结果，有两个数据稳定的小品牌，而某个试剂盒表现一般的大品牌。

老赵说，这说明不能迷信知名度，自己动手做验证才最可靠。

科研ELISA试剂盒怎么选，他总结出三条经验

在六月初的时候，老赵确定了新的试剂盒供应商，他挑选的是那款在验证期间表现最为出色的品牌，它的批间差仅仅只有百分之五，其标曲R平方稳稳地保持在0.997以上。

新品试剂盒抵达之后，彼再度对那批存有问题的样本了进行操作，所测数值同长久以来得出的数据高度相符，老板见此深感称心。

自那之后，老赵于团队之中订立了一项规矩，每一款新货号的科研 ELISA 试剂盒到货之际，都必定要先开展内部验证，而后方可用于正式样本。

要进行的验证内容当中，涵盖标的曲线性，还有质控品的回收率，以及至少两个样本的稀释之后所呈现的线性。

他要求采购，与供应商进行沟通，每次发货之际，提供相同批次的质检报告，还要保留留样，以便在可疑之时用于复测。

老赵跟我讲，从事科研工作的人极易犯下的错误，乃是假定试剂盒不存在问题。

实际上，试剂盒自身乃是一个繁杂的检测体系，任何一个环节倘若出现问题，便会致使数据出现失真的状况。

他所拥有的经验存在三条，其一，在挑选试剂盒这个行为当中，优先去查看批间差以及批内差的情况，而并非仅仅只是关注灵敏度这一方面；其二，针对每一批新的盒子，都一定要由自己来进行验证的操作；其三，一旦发现出现异常的状况，马上就要停止实验，而不要通过强行凑合数据的方式来处理。

用对方法，普通的科研ELISA试剂盒也能跑出好数据

老赵呀，还给我分享了一项小技艺呢。他们那个实验室以往洗板的时候用的那个物件是自动洗板机，参数设定好了之后就处于静止不动的状态了。

之后，他察觉到，各个不同品牌的试剂盒，在抗体结合强度方面存在差异，进而洗板程序是需要略微进行调节的。

比如新换的这个品牌，说明书建议洗五次，每次浸泡三十秒。

他进行尝试之后，发觉背景依旧是偏高的状态，于是将浸泡时间予以延长，使之达到六十秒，随后背景值马上就降了下来。

此外，孵化时的温度这个因素非常紧要，老赵特意於可以保持恒定温度的箱子内侧放入了用于测量温度的仪器，由此察觉到实际的温度情况相较于预先设定的数值低了零点五度。

别看这零点五度，标曲的最高点OD值直接掉了零点三。

他校正温度之后，标曲的斜率恢复了正常。

这些微小的细节加以表明，科研ELISA试剂盒自身并非不好，然而操作习惯以及仪器状态务必要跟得上。

现在，老赵每次在实验之前，都会使用温度计去校准孵育的环境，会运用移液器校准仪来检查移液的精度，并且，一定会定期去清洗洗板机的针头。

这些看似繁琐的步骤，实际上保证了结果的稳定。

别怕踩坑，踩过之后才能真正用好科研ELISA试剂盒

对于老赵的经历，我感触颇深。有许多人认为，ELISA实验属于基础操作，无需耗费过多心思。

但真正做过几百块板子的人都知道，试剂盒的坑无处不在。

不同批次间存在的差异，储存时条件发生的变化，乃至运输过程里温度出现的波动，均有可能对最终的数据产生影响。

老赵讲，他如今反倒感激那次踩坑，缘由那促使他系统地学习鉴定诊断试剂盒与免疫吸附测定试剂盒质量评估办法。

当前，他所在团队的数据重复性情况，于同行范围之内，是属于颇为良好的那种，就连与之合作的一方，都赞誉他们所取得的结果坚实可靠。

他以开玩笑的方式讲道，每一款科研ELISA试剂盒都是一匹不羁的野马，你必须清楚该如何去驯服它。

要是你同样正为试剂盒的稳定性而发愁，那不妨依照老赵的做法，亲自动手来展开一轮对比验证。

可能一开始会多花些时间，但长期来看，能省下无数返工的精力。

渴望，此真切的事迹，于你存有助益，致使每一回的ELISA实验，皆能够得出美观的数据。