一个实验室老手的真实经历

有个叫王磊的朋友，我以前认识他，他从事生物试剂研发工作，干了将近十年，算得上是老手了。去年年末，他更换到一家从事体外诊断试剂的公司，负责产品质控方面的事。初开始的那几个月，他天天向我倾诉抱怨，讲新公司的 ELISA 检测试剂盒存在诸多问题，把他弄得疲惫不堪、万分苦恼。

那时我居然嘲笑他，讲您这般老于世故之人怎会被试剂盒难住呢？他满是不服气，坚决声称要向我讲述他曾踩过的坑。随后又交流了几回，我这才发觉，挑选 ELISA 检测试剂盒这件事，确实并非仅仅查看一下说明书便能处理妥当的。

ELISA检测试剂盒的灵敏度到底靠不靠谱？

新到公司的王磊，首批接手的ELISA检测试剂盒是国产的，其价格着实便宜，采购部门认定性价比高。然而，首批实验做完后，他发觉灵敏度存在问题。

按照他所设定好的标准曲线来看，呈现阳性迹象的样本其吸光度的数值明显低于正常水平，出现了个别已经逼近临界值的样本直接无法检测出相关数据的情况。王磊告知我，他在当时就已经察觉到这批试剂盒里面抗体的效价并不理想，极有可能是批次之间所存在的差异过大所引致的。

他在夜里重新进行了三批平行实验，数据一经呈现，差异系数超出了15%。正常状况下，ELISA检测试剂盒的批内差异系数应当在10%以内，批间差异控制在15%以下都已然算是较为勉强的了。而他这批指标直接超额，根本不具备用来作为质控的条件。

而后，他更换了一家从事进口相关业务的ELISA检测试剂盒，其价格较之前昂贵至将近一倍，然而，该试剂盒灵敏度是稳定的，并且批间差异系数被控制在8%以内。王磊讲道，有些钱财确实是不可以去节省的，特别是在对于检测精度存在硬性要求的情形之时。

ELISA检测试剂盒的交叉反应怎么排除？

今年三月的时候，王磊接手了一个新的项目，这个项目是要检测血清当中某种特定的细胞因子的含量。他挑选了一款口碑还算不错的 ELISA 检测试剂盒，然后开始做实验，可是做完实验之后发现，阳性对照是能够跑出来的，然而空白对照的吸光度却偏高了。

经过两天的排查，他终于有了发现，血清里有一种与试剂盒里捕获抗体结构相似的蛋白，二者发生了交叉反应。王磊表示，这是试剂盒设计方面出现的问题，使用者想要通过调整实验条件解决这样的问题是极为困难的。

他没得办法，唯有再次去寻觅供应商，特意索要了一份交叉反应验证报告。这一回，他变得机灵起来，先是选用自身的样本开展了预实验，证实不存在非特异性结合情况，这才敢正式将样本放置到设备上进行检测。往后要是再挑选ELISA检测试剂盒，他必定会先向对方询问索要交叉反应数据，要是对方不给数据，那这些试剂盒他一律不会购买。

ELISA检测试剂盒的稳定性怎么判断？

去年接近年末的时候，王磊所在的公司存有一批ELISA检测试剂盒，放置于温度为4度的冰箱之中，大约历经了三个月的时间。当他将其取出准备使用时，发觉标准品的吸光度值相比于新的批次降低了将近20%。

他查验了说明书，说明书上标明的保质期是一年，然而却并未书写开封之后的稳定性数据。王磊拨打了电话询问技术支撑，对方说话吞吞吐吐，声称建议开封之后在一个月之内用完。他讲当时就感觉自己被坑了，一批试剂盒价值上千块钱，三个月的时间就报废了三分之一。

其后他形成了习惯，每当购买ELISA检测试剂盒时，必定于合同之中写明，要求供应商给出加速稳定性实验数据。他还自行制作了一个记录表，每次开封时都标注上日期，超过一个月的便严格予以废弃不再使用。他讲道，稳定性这件事情，不能仅仅去看保质期，而是应当查看在实际使用条件之下的表现。

ELISA检测试剂盒的操作步骤有没有坑？

王磊曾进行夹心法 ELISA 操作，依照说明书来加样、孵育、洗板，然而显色之后背景却格外深。他再三核查流程，最终发觉是洗板步骤里的缓冲液配方有误。

原先的那款ELISA检测试剂盒的要求是使用含有0.05%吐温 - 20的洗液，然而公司仓库所配备的却是有着0.1%浓度的洗液。他把洗液换回正确的之后，背景马上就降下来了。王磊讲，像这种细节方面的问题是最为容易被大家忽略掉的，可恰恰它就是对实验成败起着决定性作用的关键所在。

他如今但凡拿到新的ELISA检测试剂盒，就会率先将说明书由头至尾诵读三遍，把易于出错的步骤标记出来。诸如孵育时间、温度究竟是否严格，加样顺序有无特殊要求，显色液是否需要避光。这些细微之处，要是有一时没留意，整批数据便会作废。

ELISA检测试剂盒的储存条件有多重要？

今年五月上旬，王磊所在公司实验室的空调出现故障持续了好几日，室内温度攀升至三十度以上。他有一位同事未曾留意，将一批ELISA检验试剂盒置于室外长达一整晚。次日开展实验时，标准曲线根本无法绘制出来。

王磊讲，ELISA检测试剂盒里头的抗体以及酶都是蛋白质，在高温的时候极易失活。他随后特意购置了温度记录仪，放置于试剂盒的冰箱之中，每日去查看记录。一旦超过八度便会报警，以此来保证储存条件始终稳定。

对于新人他也进行了提醒，强调在试剂盒运输期间同样需要留意，要是处于夏天发货的情况，务必要添加冰袋，不然在路途上经过两天便有可能报废。他表明，ELISA这类检测试剂盒在从生产直至使用的整个阶段，温度的严控对于最终的检测质量起着决定性作用。

他现在的总结

上个月，我和王磊一起用餐，王磊已然充分适应了新公司所具有的节奏。他说道，挑选ELISA检测试剂盒，实际上总共就是包括四方面的事情：查看灵敏度，检查交叉反应性，验证稳定性，把控操作的细节之处。其中任何一样都绝对不可以省略，一旦省略那便是以自身的数据去进行玩笑般的对待。

他又讲，当下国产试剂盒的进步速度十分迅速，然而重点在于要依据实际的需求去进行选择。要是仅仅是开展批量筛查，对于灵敏度的要求并不高，那么国产的试剂盒性价比着实不错。但要是涉及到临床前研究或者质量控制方面，进口试剂盒的稳定性会更可靠。不存在绝对的好与坏，只有是否合适之分。

倘若你认为这篇文章具备有用之处，那就有必要将其收藏起来。在后续挑选ELISA检测试剂盒的阶段，把它取出来加以对照，如此起码能够助力您躲开我朋友先前踩过的那些坑。