去年的那个秋天,我有个从事免疫研究、名叫老张的朋友,差点因为实验室里的数据弄到陷入崩溃的境地。
在华东地区的那家生物科技公司中,担任研发主管的老张,手头有着一个关于细胞因子检测此类方面的项目。那家公司的老板催促得十分紧迫,而急需报告的客户满心盼着结果。然而在连续三周的时间里,老张借助手中的ELISA检测试剂盒所测出来的结果却糟糕透顶,具体表现为,标准曲线呈现出很差的线性状况,重复孔之间的CV值超出了15%,甚至就连阴性对照也出现了异常波动。
在那段日子里,他每日都对着电脑屏幕上呈现的OD值发呆,口中还念念有词地说着“这板子难道是遭受了诅咒不成”。
我向他询问究竟是怎么一回事,他这般说道: “并非是操作方面存在问题,已然更换了三个不同批次的样本,将人为所造成的误差给排除掉了,最终寻觅到根源是试剂盒自身的灵敏度不太足够。低浓度的样本完全没办法使差异体现出来,高浓度的样本却又极易出现饱和的状况。”。
他从手机里翻出存着的一张图片,拿给我瞧:同一批样本,使用A公司以及B公司的ELISA检测试剂盒,一同去进行实验操作,A公司相应的信号强度仅仅是B公司的二分之一,然而B公司的背景状况更低。
你瞧,同样是采用夹心法,有的试剂盒在抗体配对方面做得欠佳,特异性表现不佳,一旦非特异性结合增多,那么结果就全然混乱了。
有个称作老张的讲了这么回事,在这之前,他们是为了节省费用,始终在用某家规模较小工厂所生产的 ELISA 检测试剂盒,其单个产品的价格要比其他便宜几十块钱,然而,每一批次之间的差异大得实在是离谱。曾经有一回,更换了一个不同的批号,就同一个标准品而言,其 OD 值一下子直接从 1.2 大幅下降到了 0.6,这样一来,就意味着所有相关的实验都必须得重新去做了。
人工成本、时间成本、样本损耗,算下来反而更贵。
他作出了更换供应商的决定,随即着手大量查阅文献,还向同行进行询问。有一位身处苏州从事临床诊断工作的朋友作出了推荐,称有一家供应商,他们实验室使用其产品接近一年之久,数据展现出良好的稳定性。老张进而申请了该产品的试用装用于验证,采用的是自己的标准品。
他首次进行跑板操作时,特意挑选了极具挑战性的较难测量的低浓度点作为目标,即5 pg/mL以及10 pg/mL这两个数值。最终呈现的结果是,两个重复孔之间所测得的CV值均处于5%范围以内,并且标准曲线的R²成功达到了0.999这一水平。接着,他当时便立刻给我发送了消息,其内容为:“这ELISA检测试剂盒的灵敏度具备可靠性,在低端进行定量操作完全不存在任何问题。”。
后续他再度开展了加标回收实验,此项实验的回收率处于95%至105%这个范围之内,这表明了基质干扰是极小的。
老张讲,真正促使他下定决心确定下来的乃是批次稳定性测试,对于此稳定性测试他把新批次的试剂盒跟三个月先前留样予以对比,结果四个标准点的OD值偏差俱都处于10%以内,他表示“对于ELISA检测试剂盒来讲,这般批间一致性已然是颇为不错了。”。
今年三月份的时候,老张所负责的那个项目,顺利地经由客户验收通过了。他以微信的方式跟我讲道:“如今回想起来,那个时候被那个价格低廉的试剂盒坑害得极为惨重,节省下来的钱全部投入到重复实验当中去了。”。
我向他询问当下所使用的是哪一家,他仅仅表述了这么一句话,你去查找一下从事 ELISA 检测试剂盒的处于领先地位的著名品牌,寻觅那种进行验证的数据是公开的、具备能够支持定制配对功能的即可,不要仅仅着眼于价格。
针对选 ELISA 检测试剂盒这事,关键有三条。一条是灵敏度足不足,一条是批间差大小,还有一条是特异性强不强。老张踩过的坑,好多实验室都在重复。先是看文献他人用啥,接着申请试用装自己跑一回标准曲线和回收率,最后把不同批号的数据作一下比对,心里就有底了。
文章写到当下,假设你近期正为ELISA检测试剂盒的稳定性而发愁,那么不妨如同老张那般,多耗费两周时间去做验证,这可比在数据里煎熬两个月要实惠得多。






