前一阵子, 老李打电话给我, 那语气之中流露着一种好不容易才释怀的轻松感。他讲, 上个月他们实验室进行内部比对, 他最终拿到了第一名。我丝毫不觉得意外, 缘由是我清楚他为了这个“第一名”, 付出了何等大的代价。
我认识了七年的一位老朋友是老李, 他处在生物试剂这个行业里, 在一家第三方检测机构担任免疫检测组组长的职务, 关于 ELISA 检测试剂盒的使用心得体会是平常我们交流得最多的内容, 从事这个行业的人都清楚, 像 ELISA 这种东西, 看上去显得简单, 然而实际做起来其中所蕴含的门道极其深奥, 稍微一不小心, 整批实验就要面临报废的结果。
事情得从去年十月份讲起。
那个时间段, 老李所在的公司承接了一个源自某大型养殖集团的订单, 此订单要求检测一批血清样本里面的抗体水平。这批样本的数量极为庞大, 快要接近两千份了, 而客户仅仅给予五天的时间来出具报告。老李在当时拍着胸脯表明没有问题, 毕竟他们的实验室长期同 ELISA 检测试剂盒进行业务往来, 其经验就算是相当地丰富了。
为什么ELISA检测试剂盒结果总是不稳定？
第一轮实验跑下来，老李就发现了问题。
ELISA检测试剂盒处于同一批次, 操作流程相同, 然而三块板呈现的结果却无法对应。有的板子显色程度深至好似墨黑, 有的板子显色程度浅到犹如清冽白水, 另外还有一块板子根本不存在梯度变化。彼时老李一下子就陷入了茫然状态。
他对我讲, 他最初的反应是试剂盒自身存在问题, 毕竟在面向市场的ELISA检测试剂盒领域里, 能够找到的品牌数量极多, 在质量方面呈现出有好有坏不一致的状况, 所以偶然地遇见到一批属于质量较差的产品发生的概率不是完全不存在的, 接着他急忙去跟供应商取得联系, 供应商那边的态度表现得相当亲和, 并且没有讲任何多余的话语就马上发送了新的批次过来。
可新批次到了之后，情况并没有明显好转。
老李在跟我于复盘之际讲道, 在那段日子里, 他差不多每日都处于加班状态, 夜里十一点之时, 仍旧于实验室当中查看板子。他运用了各式各样的办法, 改换不同厂家所生产的ELISA检测试剂盒, 对孵育时间进行调整, 甚至于亲自去到洗板机旁边, 瞅着每一回洗涤液彻底排净。然而结果时而良好时而糟糕, 根本不存在任何规律能够依照。
ELISA检测试剂盒操作中容易忽略的细节有哪些？
真正让老李开始怀疑自己的，是十一月初的一场内部复盘会。
会议期间, 那个刚到不久的年轻小伙子不经意地询问道: “李哥, 咱们所使用的这个ELISA检测试剂盒, 其说明书上面所标注的包被温度与室温之间是否存在着特定的讲究呢? 我留意到南方地区冬季的室温与夏季的室温差异是颇为显著的。”。
这一句话，像一根针扎在老李脑子里。
他立刻意识到，问题可能出在——温度。
他们实验室的空调, 被安装在了实验区的极东边的位置, 然而, ELISA操作台却是处于最西边的地方。在十一月份时候的上海, 室内的温度并非是恒定不变的。尤其是靠近西边这一侧的实验台, 当下午两点时太阳直接照射进来, 台面的温度能够比室内的平均数值高出三至四度。
ELISA检测试剂盒的反应进程对于温度极为敏感, 包被时存在自身最适宜的温度范围, 封闭阶段有它特定适宜的温度区间, 加样步骤也有其最为合适的温域, 孵育环节同样有自己最恰当的温度窗口, 一旦这个窗口发生偏移, 反应效率就会大幅降低, 然而老李以前从来都没有认真去测量过实验台上的实际温度, 仅仅是依照空调所设定的恒温值来进行操作。
他很快就做了一回验证, 先是分别在下于不同时分所处不一样位置之上, 运用同一盒ELISA检测试剂盒去把标准品给进行测试。其后结果验证了他原有的猜想, 那便是当台面温度偏高之际, 显色的程度就会过于深浓, 而当温度偏低之时, 反应就并不完整, 且背景的值还非常出奇之高。
这个发现, 促使老李感到惊讶, 之后, 又让他完全意识到, 仅仅具备经验, 实则不行。仪器设备, 环境条件, 人为操作, 当中任何一个环节所出现的偏差, 都能够直接对ELISA检测试剂盒的最终结果产生影响。
如何选择高质量的ELISA检测试剂盒？
老李在找到了根本原因之后, 并没有着急去开展做实验, 而是首先花费利用了两天的时间, 将实验室领域的环境控制体系再次重新整理梳理了一遍。
他购置了三支具备高精度的红外温度计, 将它们分别放置于操作台, 放置于孵育箱, 放置于试剂存放区。他另专门订制了一个能够移动的恒温操作台, 以此确保在每一回进行加样时, 温度波动控制在正负零点五度以内, 确保在每一次进行孵育时, 温度波动同样控制在正负零点五度以内。
在完成那些硬件改进之后, 老李再度着手重新探究ELISA检测试剂盒的挑选标准。他对我讲, 以往挑选试剂盒时, 他着重考量价格与品牌。然而历经这回的教训, 他归纳出了一套属于自己的筛选逻辑。
关注看试剂盒的批间差, 这属于ELISA检测试剂盒质量的核心指标范畴, 对于好的试剂盒而言, 不同批次之间的性能理应高度一致, 老李当下会要求供应商提供接连的三个批次的质控报告, 将重点放在对比标准曲线的斜率以及截距方面。
查看试剂盒有关稳定性的说明, 一部分ELISA检测试剂盒对于运输以及储存条件有着极为严格的要求, 哪怕只是稍微偏离温度范围便容易失效, 老李如今倾向于更具耐受性的产品, 像能够在二摄氏度至八十度环境里稳定保存超过十二个月的那些。
盯着试剂盒去瞧其背景信号, 这通常是那种极易被漠视不见然而却相当关键的参数, 有着高背景值的 ELISA 检测试剂盒, 会致使弱阳性样本给淹没掉, 从而直接对检测的灵敏度产生影响, 老李现今每逢正式实验开展之前, 都会先用空白对照走上一趟以便确定背景值处于合理范围之内。
ELISA检测试剂盒的保存条件对结果影响有多大？
将温度与试剂盒选择的问题予以解决之后, 老李又察觉出一个新隐患, 那便是样本的保存。
在去年的十二月份期间, 当中的他们承接了一批准备发往新疆地区的样品快递。因为物流所需要耗费的时间比较长, 再加上当地的气温持续偏低, 最终样本到达的时候出现了显著的冻融痕迹。
老李讲, 他先前觉得血清样本冻一下没什么了不起的, 最多也就是部分蛋白出现沉淀。不过后来他特意去查了资料，发觉反复冻融能够致使样本里面的抗体结构产生改变, 进而对与ELISA检测试剂盒里包被抗原的结合效率造成影响。
他在当场进行了一回比对实验, 其所做的是, 将同一份血清拆分成两份, 一份径直去进行检测, 另一份历经反复冻融三次之后再予以检测, 而结果着实令人相当震惊, 经过冻融处理后的样本, 其检测得出的值竟然足足下降了高达百分之三十。
从那之后, 老李设定了一个准则, 所有送去检验的样本, 一定要具备完整的冷链运输记录, 抵达实验室之后, 马上分开包装进行保存, 严格禁止整管多次冻融。他还特意购置了一批能够追溯温度的数据记录仪, 放置在样本运输箱内, 全程对体温变化进行监测。
三月份之际, 老李身处的公司, 要参与一场行业能力验证, 这是经由权威机构所组织的盲样比对, 其结果与实验室的资质认定直接相关联。
他说, 当时老李心头是有底的。历经过去几个月的系统整顿, 他们实验室的ELISA检测试剂盒操作流程已然相当规范了。于环境控制部分、试剂验收部分、样本处理部分以及结果判读部分而言, 每一个环节都存有明确的SOP, 还有明确的质控标准。
意料之中的是, 他们组针对盲样所开展的检测得出的结果, 和参考值达成了全然的契合, 于所有参与评选的单位里, 位列第一。
我的大拇指, 是在微信上, 于老李给我发来结果截图之际回复给他的。他言道: “以往总觉自身经验充足, 对那些基础事物予以轻视。此次算是得到一次教训, ELISA检测试剂盒这事, 马虎是绝不容许的。”。
我清楚, 他言并非客套之语。于那狼狈至极的日子当中，他切实是逐个细节深入钻研领会了。
ELISA检测试剂盒实验异常结果的排查思路
假如你同样是运用ELISA检测试剂盒去开展实验, 而且老是碰到结果处于不稳定状态、重复性表现欠佳、背景为过高情形这些问题, 那么不妨参照一下老李所总结出来的排查思路句号。
先去查询环境温度, 运用温度计实际测量一下你的操作台面以及孵育环境, 千万不要单纯只查看空调设定值；一旦温度偏差超出两度, 那么反应结果便极有可能会呈现出显著差异了。
再次查一下试剂盒的储存及其使用方面, 去确认你的 ELISA 检测试剂盒是不是在规定的温度之下保存着, 是不是处在有效期之内, 是不是在运输的过程当中出现了温度异常这种情况, 试剂盒当中自带的诸如洗涤液、稀释液等辅助试剂, 同样也要进行同步检查。
对样本的处理展开查看, 样本有没有出现重复冻融现象, 有没有充分进行离心从而去除沉淀, 稀释倍数是不是准确无误, 这些细节尽管属于基础范畴, 然而常常是最容易出现问题的所在之处。
进行操作流程的查询, 加样顺序是不是规范的, 洗涤是不是彻底的, 显色时间有没有被严格控制, 每一步操作都得有明确的时间节点以及标准。
进行数据核查判读。酶标仪的波长设定是否当属准确无误？空白对照以及标准品的数值是否处于正常范围以内? 阴阳性对照是否契合试剂盒说明书所规定的要求条件呢?
如今只要做ELISA检测试剂盒实验前, 老李每次都会花费十分钟将这些点逐一仔细过一遍, 这个习惯, 帮他规避了好多低级的错误。
实际上反反复复来讲, ELISA检测试剂盒好似一把优良之刀, 刀本身拥有的质量尽管是重要的, 更具决定性意义的却是运用这把刀的人。唯有实实在在领会了其原理, 敬重其操作规范, 留意每一项看似并不起眼的细节, 才能够令这把刀展现出应有的水准。
老李所拥有的经历, 听闻起来好似那般是某一个人的事情, 然而事实上, 我坚信众多从事免疫检测的友人都或多或少遭遇过相似的状况。哪一个人不是历经从踩入坑洼再从坑洼攀爬而出这样的全程一步步走来的呢。
要是此刻你同样因为 ELISA 检测试剂盒的结果而陷入极度困扰之中, 别着急。首先要把周围环境妥善把控好, 精准挑选适配的试剂盒, 将样本妥善处理妥当, 务必把整个流程规范走好。一步紧接着一步有序操办, 迟早能摆脱困境迎来转机。
