去年年尾时, 我于杭州滨江的一家生物公司担任技术顾问, 我的主要职责是协助客户优化病原检测流程。那段日子, 一位从事第三方医学检验的友人——老周, 忽然打来了电话, 其语气之中充斥着满满的焦灼, 老周焦急地说起: “我这儿有一个临床样本, 需要进行紧急筛查, 按照常规的PCR扩增流程那得耗费两个多小时, 可客户催得特别急, 就跟催命似的, 你那边有没有什么能快速解决的方案呀? ”。
老周进入行业五年之久, 于杭州一家公司担任技术主管, 该公司主要从事呼吸道病原体检测工作。他平常为人颇为稳重, 然而那日却着实着急了起来。我询问他具体状况, 他声言样本抵达时间为下午四点, 依据实验室既定规则, 当天务必要出具报告, 可是常规PCR机器运转一轮需历时两小时, 再加上核酸提取以及体系配制等环节, 整套操作流程完成至少得花三小时。客户那边乃是社区医院, 正等着结果来开具处方, 耽搁不得。
我听完之后笑了, 然后跟他说道: “你暂且先不要着急, 我这边近段时间恰巧正好做了几款快速PCR扩增试剂盒的检测, 其成效比较不错, 你是否想要尝试一下呢? ”。
快速PCR扩增试剂盒到底快在哪
关于老周将信将疑, 让我简明扼要地说说在原理, 我告知他, 常规PCR扩增要历经变性、退火、延伸这三个温度循环, 每一步都得精确控温和有足够的时间, 常规流程大概需要90到120分钟。进而说快速PCR扩增试剂盒经过优化的DNA聚合酶和缓冲体系, 极大地缩短了延伸与退火的时间, 部分产品甚至能在25到30分钟内完成40个循环。
比如说, 有一款号称“极致快速”的试剂盒, 它把用于延伸的时间, 从通常的三十秒, 缩减到了仅仅五秒, 其中退火的时间, 被管控在了十秒这个范围以内, 从而使得整一轮的扩增时间, 径直削减了三分之二。我一边说着, 一边把以前测试得出的对比数据发送给他看。老周看完之后, 沉默了足足五秒钟, 然后说道: “那么我明天便拿样本去尝试一番。”。
快速PCR扩增试剂盒会不会影响准确性
第二个天的下午时分, 老周带着几个临床拭子的样本, 跑到了我的实验室。他讲说, 他心里最为担心的是, 快归快, 然而扩增效率会不会出现打折的情况。假阴性的风险会不会有所升高。这是许多一线检测人员对于快速PCR扩增试剂盒的普遍存在的顾虑。
我叫他别急于下结论, 我们把常规试剂盒与快速试剂盒一块儿跑了一组梯度稀释的标准品, 结果示出, 针对高拷贝数的阳性样本, 两者的Ct值差不多是一样的, 对于低浓度样本, 快速试剂盒的Ct值稍微高0.5到1个循环, 不过依旧能够稳定检测出来, 灵敏度没有显著降低。
“你瞧, 这东西可不是仅仅图速度快, 在技术层面是具备底气的。”我对着电脑屏幕上的扩增曲线, 向他指示着说道。老周这才安心下来, 当场做出决定, 要在实验室里于小范围试试使用。
快速PCR扩增试剂盒适合哪些场景
一周时间试用完毕过后, 老周借助微信发给我一则语音消息, 说道: “兄弟, 这试剂盒的味道可真是香得很。”他还向我讲述, 他们所在的实验室当下主要是将快速PCR扩增试剂盒运用在两个不同的场景之中, 一个方面是急诊样本, 就比方说是处于流感季节时发热门诊那儿的样本, 这类情况要求在两小时以内得出结果；另一个场景是小批量样本, 就像仅仅只有两三个样本的时候, 如果启动常规PCR机开展工作实在太浪费了, 但使用快速方案半个小时就能够完成工作, 效率实现了翻倍。
不过他还讲了, 针对于那种批量数量大、样本状况稳定的常规筛查情形, 就像入职体检之时呈现出的一批次样本情况, 快速试剂盒所具备的优势便没那么显著突出了, 反倒常规试剂盒在成本这一方面显得更为经济划算。我是认可他所做出的这种判断的: “快速 PCR 扩增试剂盒属于工具范畴, 并非是能够包治百病的万能特效药物, 必须得应用在关键点上。”。
快速PCR扩增试剂盒选型要注意什么
今年三月来临之际, 老周作出决定, 要将快速试剂盒正式归入实验室的常备方案之内。在进行选型期间, 他向我询问了三个问题: 其一, 关于兼容性这方面怎么样, , 究竟可不可以直接运用在他们当前所具备的ABI及Bio-Rad机器上面；其二, 涉及试剂盒的保质期以及运输条件, 毕竟而言, 快速试剂盒的酶活性常规状况下是更高一点的, , 针对于其保存所提出的要求也是更为严格的；其三, 供应商可不可以给予可靠稳定的批次一致性，以此来防止在更换批号之后出现相应结果偏差的情况。
我依照这几个维度为他挑选出了三款处于市面上主流地位的快速PCR扩增试剂盒, 逐个进行了平行测试。最终他选定了那款在退火温度宽容度方面呈现最佳表现的试剂盒, 是由于他们所拥有的样本其来源繁杂多样, 核酸纯度存在较大波动，而宽容度较高的试剂盒能够降低重复检测的概率。
快速PCR扩增试剂盒的使用体验
上周五, 我去到老周的那个实验室去串门, 当时他恰好是在处理一批从社区医院给送来的咽拭子样本, 他很是熟练地配好了体系, 之后放入到机器里面去, 然后指着在屏幕上倒计时的进度条对我说, 以前在这个时候我是要守着机器在那里干等着的, 现在则能够同时去处理下一批样本, 时间的利用率要高很多。
他提及了一个细节, 快速PCR扩增试剂盒说明书所写极为细致, 涵盖热盖温度建议设置, 反应体积推荐范围表述, 甚至退火时间微调查明, 被标注以。在他实验室那新请来的实习生依照此进行操作, 首轮跑出的结果颇为稳定, 基本无需老手亲自指导。
笑着回应他的我说道: “这般情形下你所做这一切能不能算做是技术将生产力予以解放? ”老周点头, 而后说道: “是算的, 起码当下我已无需每日都加班直至晚上九点了。”。
