上个月, 老同学阿强, 是我那个从事基因检测研发工作的, 差一点就要被一个项目给逼到发疯的状态了。

阿强于一家生物科技公司工作了五年, 其主要负责肿瘤早筛产品的开发, 他技术底子深厚, 平常话语不多, 然而做事极其较真, 去年年末, 公司承接了一个大订单, 需开发一套针对结直肠癌的早期甲基化检测方案, 客户催促急切, 预算限制严格, 阿强带领团队连续忙碌了两个多月, 结果在关键环节停滞了, 那就是甲基化特异性PCR实验的重复性始终无法达到标准。

“你可晓得那种感觉不? 恰似你分明瞅见终点线了, 然而腿却无法挪动。”阿强于某天夜里给我打来电话, 那声音之中充斥着满满的疲惫。他尝试了市面上三款各异的试剂盒, 有的扩增效率那般低, 有的非特异性信号过于强, 还有的一批次的稳定性差劲至使人崩溃。曾经有一回, 针对同一批样本, 上午与下午所跑出的结果相差近乎两倍, 气得他差点将移液器给摔了。

在那一段时期当中, 阿强差不多每天都沉浸于实验室之内。他全面查阅了国内以及国外的文献资料, 与好几个供应商的技术支持方面取得了联络, 甚至于自己掏腰包购买了进口的试剂盒用以进行对比。然而, 问题依旧是存在着的: 甲基化特异性PCR对于引物以及探针的设计所提出的要求是极为高的, 普通试剂盒的灵敏度根本就无法满足临床样本的检测需要。

三月初作为一处转折点出现了, 有关阿强在北京参与一场行业交流会, 于茶歇之际跟一位同行谈及这个困境, 那位对方听闻他的描述后, 直接猛地拍了一下大腿, 说道, 你早讲述为何不提前说此事, 我们以前也碰到过这个坑, 随后更换了一款专门进行优化的甲基化特异性PCR试剂盒, 如此一来问题便全部被解决掉了。

那阿强, 是半信半疑着要了联系方式。之后, 他回了去, 接着便迅速联系了那家公司的技术团队。而对方, 并没有急着去进行产品推销这么回事, 反倒是先让阿强把背景样本寄过去, 随后用他们自己的试剂盒做了一轮预实验。又过了三天, 结果出来了。灵敏度提升了至少两个数量级, 非特异性信号几乎是零, 并且批次间的Ct值差异控制在0.5以内。

阿强更意外的是, 那款试剂盒做了特殊处理, 采用其双重淬灭技术, 这种技术能有效抑制背景干扰, 同时在引物设计上, 通过优化缓冲体系, 其已提高了对低丰度甲基化模板的捕获效率。阿强后来跟我解释, 这类似在喧闹菜市场, 本来你仅能听见身旁人言语, 但是这款试剂盒就像给装了定向mic, 连角落讨价还价声都能清晰捕捉到。

在四月中旬之际, 阿强所带领的团队, 借助全新的试剂盒, 再次从头到尾对所有验证样本进了行操作, 结果显著令人感到振奋不已: 不仅特异性达到了99.2%, 而且最低检测限降低到了0.1%的甲基化水平, 整个一从样本处理开始一直到结果输出的流程, 仅仅只用了不到四个小时的时间。最终项目顺利地通过了内部评审, 在客户那边也得到了高度评价。

在此之后, 阿强针对这件事来进行复盘, 而后跟我讲了这样一句话, 其表示: “展开甲基化检测, 其中的核心内容就涉及三个字, 分别是——稳、准、快。所谓稳指的是重复性, 而准说的是特异性, 快所代表的则是效率。要是这三项之中缺少任何一个, 那么之前所投入的功夫就全都白费了。”。

他讲的这番话语, 使我忆起众多从事搞研发的友人都共有的一种毛病, 那便是总是想着凭借自身硬是去扛住, 碰到技术方面的瓶颈之时, 也不愿意去更换工具。然而实际的情况却是, 在甲基化特异性PCR这个领域范围内, 试剂盒的挑选抉择直接就决定了实验的成功与失败。一款优良的试剂盒, 能够帮你节省下最少一半的调试所用时间, 更为关键重要的是,它能够确保结果是经得起仔细琢磨推敲的。

这会儿, 阿强的那个项目已然步入临床验证时期, 成效比预想的还要好。他时不时会跟我说起: “要是早晓得当初径直选用对甲基化特异性PCR试剂盒, 怎会白白熬过那两个月呢。”。