你发生过这样的事吗: 买回一个 ELISA 试剂盒, 然而实验做不成, 重复性欠佳, 数据完全没法用了, 对? 别着急, 对于此事我结识一位叫做老张的朋友可以说道说道, 他往昔在生物公司工作有三年还多, 日常都在跟 ELISA 试剂盒打交道。他曾踩过的坑以及总结得出的经验, 我认为是值得拿出来谈论一番的。这篇文章并非很高深上档次的理论内容, 只是老张亲身经历的实实在在的事情, 期望能够让你少走些冤枉路。
老张是谁，他到底在干什么
老张今年三十刚过不多, 于一家规模处于中等状态的生物科技公司担任研发主管, 他所负责主导的项目主要在于开展免疫检测类产品的发展工作, 简单来讲, 就是每日与形形色色的ELISA试剂盒进行诸多接触, 从原料的挑选甄别开始, 到方法的优化改进, 再到最终产品的验证, 他独自承担了七八个项目的相关任务, 公司内部的人员都称呼他为“ELISA老手”, 可是老张自己讲这个“老手”名号, 是凭借无数回失败的经历才得以换来的。
他开始发现ELISA试剂盒不对劲
去年夏天的时候, 老张承接了一个新出现的项目, 这个项目要求检测某一种细胞因子在小鼠血清里的含量, 该项目时间紧迫, 任务繁重, 公司的采购部门贪图省事, 直接寻觅了一家价格较为便宜的供应商, 购买了一整批ELISA试剂盒, 老张把试剂盒拿到手的时候没有过多去思考, 依照既定步骤开始进行实验，结果第一批数据呈现出来候, 他愣住了, 同样的那些样本, 遵循同一个操作流程, 做出来的结果有着很大的 fluctuate, 有些孔几乎检测不到信号, 有些孔信号出奇地高了很多。
那几天晚上, 老张声称自己睡眠状况欠佳, 不断反复核查实验步骤, 心中怀疑自身操作存在差错。他的同事劝其更换一批试剂盒进行尝试, 他却强硬地回应称“不过就是ELISA试剂盒罢了, 理应问题不至于太大”。然而数据有着不容置疑的特性, 经过连续三次的重复实验, 结果始终处于不稳定状态。最终他得以明白, 此事并非仅仅关乎他个人的操作, 问题的根源实则在于试剂盒本身。
他尝试自己排查问题
做事认真的老张, 不甘心就这么放弃, 他开始从头梳理问题可能出的地方, 是包被抗体浓度不对吗, 还是酶标抗体批次有差异, 又或者是洗板步骤不够标准, 他把每个环节都列出来, 逐一排查。
那两周, 他花了几乎每天的时间待在实验室里。他先更换了不同批次的样本去做对比, 结果发现高背景干扰的情况特别严重。他接着又尝试对孵育时间以及温度进行调整, 然而效果却是微乎其微的。彼时老张跟我吐槽讲: “感觉如同在黑暗当中摸着墙去走路, 明明清楚墙就在那个地方, 可是却愣是寻不到门。”。
终于找到了关键原因
一日, 老张偶然翻到一本颇为冷门的技术手册, 手册之中提及了ELISA试剂盒里酶标抗体的稳定性情况。他瞬间受到了提示。他赶忙将手中那批试剂盒的说明书找出并仔细查看, 发觉此供应商所提供的酶标抗体效价标注得含糊不清, 且并未给出详尽的批次间一致性数据。
老张即刻去联系供应商, 那供应商说话吞吞吐吐, 号称“或许是在运输进程里保存方式不妥当, 致使抗体活性出现下降的状况”。老张心里清楚, 这极有可能是生产环节自身就存有问题。他拿定主意改换成另外一家供应商。此次他变得机灵起来, 在采购之前先要了小 batches 试用的样品, 而且要求对方给出完整的性能验证报告。
换了新的ELISA试剂盒之后
到手新供应商的ELISA试剂盒后, 老张做了一次预实验。结果使他松了一口气, 背景干净, 标准曲线线性佳, 重复性与平行性均达预期标准。他连续测试三批样本, SD值跟CV值控制良好, 数据漂亮得让他自己都忍不住多看几遍。
老张后来跟我讲, 以前一直觉着便宜等同于省钱, 如今才弄清楚, 省下来这般一点钱, 最终全都成了时间以及精力方面的浪费 , 这话, 我认为众多做实验的人士都会感慨颇深。
他总结了一套选盒子的方法
老张如今于团队里承担ELISA试剂盒采购评估工作, 他构建了一套归属自己的筛选标准。其一, 他要求供应商务必提供详尽的批次信息, 涵盖批间变异系数以及有效期内的稳定性数据。其二, 他要查看试剂盒的抗体对有无历经严格的交叉反应验证, 防止非特异性结合引发的背景干扰。其三, 他亦建议大家在开展正式实验之前, 先用已知浓度的标准品跑完整个流程, 确保试剂盒在自身的实验体系里是有效的。
他讲道, ELISA试剂盒是否好用, 仅仅看宣传材料是没效用的, 必须得自己动手去尝试。一个真正值得信赖的试剂盒, 理应能够让你在进行重复实验之际, 就算闭着眼睛也均能操作完成得出结果, 而并非每一次都好似开启盲盒那般。
从个人经验到团队经验
这段经历被老张整理成了一份内部培训资料, 并分享给了公司其他实验员, 现在他们团队存在个不成文规定, 即凡是新采购的ELISA试剂盒, 都必须先历经两周的试用测评, 合格以后才能够批量入库, 此方法尽管多耗费了一些前期时间, 却大幅提高了实验的成功率。
曾经有一回, 公司举行季度会议, 在那次会议当中, 老张的老板对他予以表扬, 声称他“借助一次经历挫折换得了公司一整年实验质量的提高”, 老张笑了笑, 跟我讲说: “暂且从表面上来看, 好似是运气不错, 然而实际上, 唯有我自己清楚, 那是经由多少个无眠之夜才换取来的。”。
最后想说的
老张讲完了故事, 没错！我感觉到, 他所踩过的那些坑, 事实上, 好多搞实验的人都碰到过。ELISA试剂盒这玩意儿, 瞅着挺简单, 然而, 真正要做好做稳它, 这里面的门道可真是特别多！从抗体对的搭配开始, 一直到反应体系的优化, 每一个步骤, 都或许能够决定数据的成败！选对一款靠谱的试剂盒, 可不单单能够节省时间, 更是能够让你的实验结果经得起仔细的推敲！
要是你此刻也正因为ELISA试剂盒老是接二连三地出现状况而感到苦恼烦闷, 那不妨暂且停下手中之事思索一下: 是不是也应当如同老张那般, 转换一种想法, 更换另一样产品去尝试一番呢? 某些情形下, 问题并非出在你自身这里, 而是藏在那个盒子当中。
