我认识一个做细胞培养的朋友

我存在一位名为老周的朋友, 于长三角地区的一家生物公司担任研发主管一职, 其专门对细胞培养这个领域予以负责。他从事这一行业将近十年时间了, 从刚刚毕业之际于实验室里从事打杂事务, 演变至如今带领十来人的团队, 算得上是在圈子当中有着一定名气的“细胞培养经验丰富之人”。然而你可知道呀? 就在去年的时候, 他差一点因为细胞出现污染的问题而惨遭老板责骂直至面临辞职的情况。

做细胞培养总是污染怎么办？

主要从事干细胞相关产品研发的老周所在公司, 细胞培养乃是其最为核心的环节。去年夏天的时候, 他们承接了一个大客户所下的订单, 要去制作一批用于临床前研究的间充质干细胞。按道理来讲, 老周团队的经验已然足够成熟了, 从培养基的配制一直到无菌操作, 每一个步骤都存在着SOP。

能奇怪的事情发生了呀 , 接连有三批细胞 , 它们各自在培养进展到第五天那个时候 , 居然都出现了细菌污染的状况。培养基由此变得浑浊起来 , pH值跟着下降了 , 细胞最终全部死掉了。老周在那段日子里 , 几乎每天都在加班 , 对培养箱 、超净台 、血清批次进行了排查 , 甚至还把整个实验室从头到尾做了一番彻底的熏蒸消毒。

细胞培养污染源到底在哪？

到了2025年8月, 有个周末, 老周约我去喝酒, 他满脸带着愁容, 说着: “我实在想不明白, 所有的操作全部都是按照标准去进行的, 而且耗材每一个也都是大牌子的, 可怎么就老是出现污染的情况呢? ”。

当其时, 我随意地问了那么一句: “你对细胞培养的起始密度进行过排查吗, ”，“有的时候并非是污染情况, 而是细胞状态欠佳所引发的假阳性现象。”。

老周一愣, 说道这点他可没有留意。随后他返回去再次进行复盘, 发觉近期因赶工期, 团队为了能产出更多数量, 将每瓶细胞的接种密度提升了差不多一倍。结果细胞在培养后期代谢产物出现堆积, 培养基变得发酸, 眼睛看上去好似被污染, 实际上是因细胞密度过高致使了凋亡, 细菌仅仅是继发性感染。

怎样避免细胞培养中的假阳性污染？

此发现令老周猛地一下子就醒悟过来了, 随后其于团队内部搞了一回专题培训, 着重指出细胞培养进程里头绝对不可以仅仅只去看那些表面呈现出来的现象, 2025年9月之时, 他们又承接了一批大同小异的订单, 这次依照经验密度来接种那是相当严格的, 每瓶在细胞容纳量上控制于2×10⁵个细胞/mL, 与此同时还提升了每日在显微镜之下观察细胞形态的频次。

在那批细胞培养期间, 进展异常顺遂, 直至收获阶段时, 细胞活力已然高于95% , 客户验收环节一次性顺利通过。后来老周对我讲述, 在其历经诸多细胞培养工作的漫漫岁月里, 所领悟到最为深刻且长久的行事教训在于, 绝不可一味盲目地迷信既定规程, 还应当凭借实际状况, 进行灵活多变的适时调整。

细胞培养中培养基配比该怎么调？

就实际情况而言，除开密度方面的问题之外, 老周还遭遇过另外一个极大的失误。2025年3月的时候, 他们的公司引入了一种全新的无血清培养基, 宣称能够大幅度地提高细胞增殖的速度。老周遵照厂家所推荐的配方直接予以使用, 然而结果是细胞生长得极为迅速, 可是当传代至第三代的时候就开始出现分化的状况, 干细胞标志物的表达呈现出下降的态势。

他查阅了数量众多的文献, 还与数位同行展开了交流, 进而发现此种培养基的葡萄糖浓度偏高, 针对他们所使用的那一株细胞而言, 必须将谷氨酰胺的浓度从起初的2mM调整至4mM, 方可维持细胞的干性, 调整过后, 问题果真得到了解决。

细胞培养时血清到底该不该加？

现今诸多实验室都在推行无血清培养, 然而老周讲, 不能够一概论之。将于2025年12月的时候, 他们给一家医院送去一批用于免疫调节实验的细胞, 那家医院提出要求, 必须得使用含有胎牛血清的培养基。老周对两批细胞做了对比, 发觉添加血清的那一批在促炎因子分泌能力方面的确是更强一些。

于是乎, 在二零二六年年初之际, 于公司所举办的技术会议当中, 此人提出这样的观点: 关于细胞培养方案的挑选这个行为, 必然是需要紧密结合最终将会应用的场景情况, 以此来做出决定的。绝不能够只因想要节省成本抑或是追逐流行趋势, 进而毫无依据地去改变培养所需要的条件。

细胞培养中的支原体污染怎么查？

这是老周于近期半年着重予以关注的问题 , 在2026年2月 , 他们的一个合作实验室反馈称 , 所收到的细胞样品支原体检测呈现为阳性 , 老周惊了一下 , 因为按照他们的常规检测是每批次进行抽检 , 而结果呢就是这批恰好没有被抽到。

他马上开启了那种一应俱全流程的排查工作, 最终找寻出原来是放置液氮罐里的种子细胞, 在进行冻存操作之前就已然存在着具有低载量特征的支原体污染状况。而在此事过后, 老周强行规定: 所有进入库房里面的细胞都必然要进行支原体PCR检测这一系列举措, 并且每一个季度都要针对液氮罐展开一次环境方面像抽取样品那样的操作。

细胞培养传代次数控制在多少比较好？

老周所拥有的经验是, 依据细胞类型存在差异, 传代次数的上限会有着极大的不同, 像是他们时常采用的骨髓间充质干细胞, 通常主张在P5范围以内予以使用, 一旦超过P8便极易出现衰老状况, 在2026年4月, 存在一位实习生为了贪图省事这一目的, 将一批处于P6的细胞接下来又传了三代之多, 最终在进行功能实验的时候全然没有任何效果。

老周制作了一张传代次数的对照表, 把它张贴在每一个培养箱的旁边, 并且明确规定, 不一样细胞株的使用代数之上限。如今团队之中的每一个人都严格去执行。

细胞培养中污染后该怎么彻底消毒？

上个月的时候, 在2026年5月期间, 老周的实验室出乎预料地发生了一回真菌污染。当时, 有一个培养皿长出了毛霉菌, 毛霉菌的孢子飘散到了整个培养箱之中。面对这种情况, 老周并没有表现出慌张, 他依据以前所积累下来的经验, 先是关停了培养箱, 接着使用75%酒精擦拭了所有的内壁, 随后又用过氧乙酸进行了8小时的熏蒸, 最后进行了紫外线照射直至过夜。与此同时, 他还把培养箱的HEPA过滤器换成了新的。三天过后重启了培养箱, 之后连续进行空白培养一周时间, 最终并没有出现任何污染迹象。

写在最后

常言说的老周, 从事细胞培养工作时觉得恰似养育孩子那般, 靠书本里知识并不足够, 还得于日常操作期间积累经验。如今他带领新人之际, 头一句话总会这般讲: “别认为无菌操作便足够可以, 细胞培养里每个细节都兴许决定成功或者失败。”。

要是你同样在从事细胞培养, 碰到过近似的污染状况或者面对着细胞状态欠佳的问题, 不妨掉转头去瞧瞧自身的操作流程, 很可能那些藏在平常习惯里的小细节就是症结所在。