为什么我要写这篇文章
上周, 老张给我打了电话, 其声音之中尽是疲惫。他讲自己持续加班达一个月, 然而因试剂盒选被错, 致使整个项目的数据通通作废作罢。挂断电话之后, 我决意将我与他的经历撰写下来, 期望能够让更多从事科研工作的朋友较少地走上弯路出错。
老张的课题组到底出了什么问题
我有个师兄老张, 是我以前在研究所读博之际结识的, 足足比我大三届, 如今呢, 在省农科院任免疫检测方向的课题组长这个职位。去年将要结束之时, 当时他们那个团队接受了一项由省里重点立项的课题, 是针对某种新型植物病毒在田间的传播规律方面进行研究的。
老张当初是怎么选的ELISA试剂盒
3月初的时候, 老张带着两个硕士生开启了实验, 由于项目时间紧迫, 他没有进行仔细比对, 就直接从合作了三年的供应商那里购买了一盒常规的双抗体夹心ELISA试剂盒, 当时他还跟我说, 那个是老牌子, 已经用了五年, 不会出现问题。
第一次发现不对劲
4月15日那天, 老张向我发送了条微信, 内容是, “兄弟, 我这儿的数据存在些怪异之处之处, 具体表现为, 空白孔的吸光度相较于阳性对照而言还要高。”我询问他使用的稀释液是什么, 他的回答是试剂盒所自带的那种。当时我就向他作出了提醒, 某些价格较低的试剂盒所配备的稀释液有可能产生非特异性反应这种情况。
问题越来越严重
4月底时, 老张的实验室已然浪费了将近200份田间样本, 他们做了重复三次的操作, 然而每次得出的结果都存在差异,其中最离谱的一回, 同一个样本的OD值从0.8跳跃到了2.1至此, 老张开始对试剂盒批间差过大产生怀疑。
为什么ELISA试剂盒选不对就全白费
遭遇并非个例的老张；我于生物试剂行业从事六年技术支撑工作, 这样类似的案例见识过许多；ELISA试剂盒是一个对稳定性极度依赖的实验体系, 偏差在任何一个环节都会传导至最终数据。
灵敏度不够会怎样
老张所检测的那种病毒, 在植物体内的含量是很低的, 常规试剂盒的检测限大概在每毫升500皮克左右, 然而目标病毒的浓度常常仅仅只有300皮克。这就仿佛是使用网眼过大的渔网去打捞小鱼, 捞上来的全都是一些漏网的呀。
特异性差后果更严重
在刚进入5月的时候, 老张更换了一款宣称具有高特异性的试剂盒。然而, 其交叉反应率竟然高达15%, 将另外一种并无危害的植物蛋白识别成了呈阳性的状态。课题组当中的两个硕士生, 为了对数据进行校对, 在连续两周的时间里, 每天都工作到凌晨两点。
稳定性是命门
有个老张, 最后去查了试剂盒的批号, 他发现那件东西那批次的生产日期是去年8月份, 此日期已接近说明书上边标注的保质期终点。后来他跟我讲: “早知道的话, 就应当先去做一次批间差验证, 现在想来, 是自己大意了。”。
老张到底怎么找到的出路
5月中旬的时候, 老张完全地摒弃了原本的方案, 他叫我去协助联系国内几家专门从事ELISA试剂盒制作的厂家, 我举荐了深圳一家在植物病毒检测范畴有着十年经历的公司。
老张做了三步关键选择
第一步, 他将目标病毒的保守序列发送给我, 我协助其证实了试剂盒内的包被抗体是否针对此序列。第二步, 他索要了三个不同批次的试剂盒, 自行开展了一回批间差对比实验。第三步, 他特地要求采用自家实验室的PBST稀释液, 而非试剂盒所附带的。
数据终于稳住了
5月28这一日, 老张给我发过来截图图片, 新的试剂盒其批间变异系数下降到了5%范围以内, 空白孔的OD值稳稳地处在0.05这个数值左右, 他讲说, 终于能够睡上一个安稳觉睡眠了, 6月初的时候, 他们这个团队凭借新试剂盒再次检测了先前留下剩余的80份样本, 此次的结果呈现出高度的一致状态。
选ELISA试剂盒到底应该看哪些指标
要是你同样正因挑选试剂盒而犯愁的情况下, 记好老张所经历过的那些坑。其一, 别单单去瞅品牌, 得瞧瞧检测限以及定量范围是不是跟你的目标物相契合。其二, 交叉反应率绝对必须得低于1%才可以, 尤其是在进行血清学检测这个时候。最后呀, 买回来之后要先去做三件事情: 对稀释液进行适用性测试, 对批间差开展验证, 进行加标回收率实验。
哪里能找到靠谱的ELISA试剂盒
老张过后跟我讲, 他如今挑选试剂盒光是留意两点, 其一呢是厂家有无给出完备的质控报告, 其二是可不可以给出免费试用装。他当下合作的这家位于深圳的公司, 每一个批次都附带SDS - PAGE以及Western blot的抗体验证图谱, 这在行业范围之内已然算是极为规范的了。
老张现在怎么样了
上周六, 我们进行视频聊天, 老张身处实验室, 一边着手整理数据, 一边脸上浮现笑容。他讲课题进展顺利有加, 两名硕士生已然学会鉴别试剂盒好坏的方法。与此同时, 他还将新试剂盒的厂家信息发送至课题组的群里, 以便让其他老师当作参考。我明了, 过去这半年的时段对他来讲太过珍视, 不过起码当下, 他终于无需再为试剂盒的问题而发愁了。
