为什么要读完这篇文章
也许你正为肿瘤细胞株相关实验而发愁, 不清楚该从哪儿寻觅靠谱的细胞株, 又或者购买后养不活, 实验数据始终不稳定。这篇文章讲述的是我朋友老赵的真实经历, 他从遭遇困境到脱离困境, 每一步都值得正在从事肿瘤研究的你借鉴, 可供你参考。
在生物公司工作之际, 我结识了老赵这位朋友, 他于一家刚创立的生物科技企业担任研发主管, 工作职责主要是开展肿瘤药物的体外药效评价, 具体而言, 其每日都要与各类肿瘤细胞株相互接触, 借助它们去检测候选药物产生的效果。
肿瘤细胞株选不对，实验白费
赵国刚担任项目负责人之初时, 那所公司的预算处于紧张受限状况, 为了节省开支费用, 他于国内一些规模较小的平台购置了若干价格低廉的肿瘤细胞株。但后来第一批进行的实验却遭遇了问题, 具体表现为细胞生长速度缓慢, 呈现出来的状态欠佳, 所做出的IC50曲线与文献当中展示的情况不相匹配不能符合。
老赵后来跟我说, 那时他真是头大, 老板天天催着要进度, 而实验取得的数据怎么都无法说出个所以然来。他耗费了整整两周时间进行复盘, 才察觉到在细胞株的源头鉴定方面出现了问题。
买细胞株之前要先确认什么
在2023年7月的时候, 老赵于杭州参与了一个生物医药展会, 跟几个同行进行了交流, 这才知晓选择肿瘤细胞株存在相应门道。他归纳了几点, 其一, 要查看供应商是不是提供STR鉴定报告, 这可是确认细胞株身份的关键标准；其二, 细胞株的代次越低越为适宜, 传继次数增多容易出现基因漂变；其三, 最好挑选具备支原体检测阴性报告的相关产品。
老赵表示, 以前他觉得只要是肿瘤细胞株, 随意买一个便能够使用, 实际上相差甚远。后来, 他更换成了一家具备正规资质的供应商, 尽管价格贵了些许, 然而收到的细胞株附带完整的鉴定报告, 使用起来内心踏实。
肿瘤细胞株培养失败的常见原因
原本以为换了一批细胞株后就不会有问题了, 可老赵没想到还是出状况了, 这不, 在2023年9月的一个下午, 他把新到的HepG2细胞株从液氮里取出来进行复苏操作, 然而两天之后查看时, 却发现细胞贴壁率竟然不到30%。
老赵着急起来, 拨打了电话给供应商那边的技术支撑, 对方朝着老赵询问了一连串的问题: 培养基所采用的是什么种类? 血清批次是否具备稳定性? 培养箱的CO₂浓度以及温度有没有校准过? 老赵开展了逐一检查, 发觉培养箱的温度探头出现了1.5℃的偏差。
为他的细胞株复苏失败的便是这1.5℃的温差 , 老赵后来养成了习惯 , 每次做实验之前 , 先用红外温度计测量一下培养箱的实际温度。
肿瘤细胞株实验数据为什么总是不稳定
2024年1月, 老赵所负责的项目步入关键时期, 要借助肿瘤细胞株开展一组浓度梯度实验, 他依规严格依照标准流程予以操作, 然而连续三次进行重复实验, 其结果波动幅度极大, 变异系数超出了20%。
老赵开始疑惑, 究竟是不是细胞株自身存在问题呢。他查阅了数目众多的文献, 还向行业内的前辈进行了咨询, 最终发觉了一个极易被忽视的因素, 那就是细胞株的融合度对于实验结果的影响是极其重大的。同一肿瘤细胞株, 在处于80%融合度的时候加药, 以及在处于95%融合度的时候加药, 细胞对于药物的响应呈现出全然不一样的情况。
那个时候之后, 我每一次进行铺板时, 都对细胞密度予以严格把控, 保证每一个孔当中细胞的数量达成一致。老赵讲道, 在这个细节得以改进以后, 他的数据重复性一下子就提升了。
肿瘤细胞株实验中的污染问题怎么解决
弄肿瘤细胞株相关试验, 最担忧的便是出现污染情况。老赵所在的公司并非那种无菌状态的车间, 实验室的条件存在一定限制, 在2024年4月这个时间点, 他碰到了最为棘手的状况——有一批细胞株遭受了真菌的污染。
老赵在那段几乎令其崩溃的时间里, 前前后后排查了一个星期, 他把实验室里所有的耗材换了一遍, 又把所有的试剂换了一遍, 还把所有的培养基换了一遍, 甚至连通风管道都找人清理了, 最后发现罪魁祸首是一个同事经常用的移液器吸头盒，该吸头盒盖子没盖紧, 致使吸头被灰尘污染了。
老赵如今在每次做实验之前, 无论自己本身有多忙碌, 都会先去查看一下培养箱当中的水盘是否添加了抑菌剂, 还要确认培养瓶的瓶盖有没有拧紧。他讲道, 养育细胞株和养育孩子是一样的情况, 丝毫都不能偷懒。
肿瘤细胞株实验中的关键时间节点
2024年6月, 老赵接手了一个新项目, 该项目需要用三株不同的肿瘤细胞株来做联合用药实验, 这次他准备得十分充分, 从订购细胞株开始直至正式实验, 每一步所经历的详细时间他都做了记录。
细胞株到货之后的头一件事情, 并非径直去做实验, 而是先要进行一部分扩增, 将其冻结储存起来当作种子细胞。老赵讲, 一棵肿瘤细胞株拿到手里以后, 在下一述三代之内达成验证实验, 一旦确定没有问题, 就赶忙分开包装进行冻结储存, 防止后续传代次数过多致使细胞特性发生变动。
对于很多新人而言, 他们并不清楚, 会认为细胞株所要饲养的数量越多便越好, 然而实际上, 当传代次数超过15代以后, 众多的表型就会发生改变。老赵所拥有的经验是, 在每一次进行实验的时候, 都会选用低代次的细胞株, 宁愿花费更多的时间去进行扩增, 也绝对不会使用高代次的细胞株凑合着用。
肿瘤细胞株实验的长期管理经验
直到2024年9月之时, 老赵已然积攒了差不多一年的肿瘤细胞株方面的实验经验, 他制作出了一个实验管理表格, 该表格当中详尽记录着每一株细胞的来源于何处、其代数是多少、复苏的具体日期是什么时候、传代的次数究竟有多少、每一次实验所呈现出的结果如何。
“此刻我掌上掌控着十几株源于各异之处的肿瘤细胞株, 而对于每一株, 均构建了独立的台账。”老赵讲道, 如此行事所具备的益处在于, 一旦某一细胞株的数据呈现出异常状况, 他便能够即刻追根溯源, 明确问题究竟出在哪个具体环节。
当时老赵跟我讲, 他当下实验成功的概率相较于之前提升了不少, 而且老板对他愈发信赖有加。在二零二五年春节来临之前, 他们那儿有一款备选药物迈进了进行IND申报的阶段, 而老赵所负责的体外药效方面的数据就成为了支撑申报材料的关键部分。
肿瘤细胞株实验中的避坑要点
回顾老赵这一年多的经历，我总结了几点对你有用的东西：
在挑选肿瘤细胞株之际, 别单单只瞅价格, 得去看供应商有没有给出STR鉴定报告, 以及支原体检测报告, 这可是最为基础的保障呀！
细胞株拿到手之后, 先开展一回快速验证, 去确认细胞形态以及生长特性与论文描述是相符的, 之后再进行大规模的扩增以及冻存。
于每次开展实验之前, 对培养箱、培养基以及耗材的状态予以检查, 切莫让微小的细节致使你耗费几周时间所进行的工作遭受破坏。
对每一株细胞的传代次数予以记录, 同时记录关键实验参数, 进而建立起属于自己的细胞株管理档案。
现在, 老赵时不时的仍旧会跟我开开玩笑, 讲他往昔走过了那么多的曲折道路, 全都是源于对肿瘤细胞株欠缺足够的认识。然而, 恰恰是这些曾经经历过的挫折, 促使他转变成了名副其实的专家。
要是你同样在开展肿瘤细胞株关联的研究, 期望老赵亲身经历能够助你减少一些不必要的曲折路程。实验不存在便捷之道, 然而有些容易犯错误的地方, 绝对能够避免。
