读这篇文章之前，我先交代一下
这篇文章并非广告, 乃是我一位老同学的亲身经历, 他于生物试剂行业里摸爬着滚打了十来年, 最近一年因公司项目进行调整, 而被迫从传统生化检测转向微板法, 说实话, 起初他心里十分没底, 然而最近他同我谈及此事, 称这半年多踩了相当多的坑, 且还摸索出了一些颇为实在的经验, 我觉得他踩坑的历程以及最终的收获, 对于正考虑或者刚刚开始运用微板法的同行而言, 应当颇具参考价值, 我将他的经历整理出来, 期望能助你少走些许弯路。
先说说我朋友的工作背景
我有个朋友姓王, 我们全都称呼他为老王, 此君本科所学专业是生物工程, 毕业后始终待在一家从事体外诊断试剂的公司里, 其主要职责是负责生化检测试剂的研发以及工艺的优化, 他们公司所生产出来的产品、主要供应给各级实验室, 从高校科研单位直到第三方检测机构都是能够用到的, 老王他这个人做事情相对比较较真, 不太乐意听别人去画大饼, 而是更加倾向于自己动手去进行验证。今年年初的时候, 公司的技术总监从国外参加完展会归来, 带回了一个信息, 那就是国外同行已经开始大规模采用微板法来做生化检测了, 这种方法通量高, 并且成本低, 操作还简化了不少。总监把这个方向确定为今年重点攻关的项目, 指名要老王牵头去做技术验证。老王当时心里实际上是有些忐忑的, 毕竟此前实验室里一直用的都是传统的比色杯法, 从设备, 到流程, 再到试剂体系都非常成熟, 突然要更换赛道, 万一搞砸了该如何是好呢?
刚接手微板法，他心里也没底
老王跟我讲着, 当他刚拿到微板法的资料之际, 他的第一反应是“这不就是换了个耗材嘛”, 然而, 在真正着手深入去了解以后, 才发觉并非那般简单, 这微板法所采用的是96孔板乃至于384孔板, 每个孔的反应体积仅仅几十到两百微升罢了, 这情形跟传统那每次加样体积动辄一两毫升体系完全是不一样的, 反应体积变小了, 这就意味着对于加样精度、反应时间的把控以及读板波长的校准要求全都更高了, 老王他们的实验室之前做生化检测之时, 都是依照常规步骤进而用手工加样, 针对一个样品就使用一个比色杯, 做完清洗之后再去测下一批。首先, 微板法注重批量处理, 它的特点是一个板子能够同时对几十个样品进行检测, 所以在流程方面需要重新去做设计。然后, 老王讲, 存在的最大障碍并非设备, 而是人的思维。接着, 他自己在第一个星期的时候就犯下了错误, 在加样期间没有留意板子底部的平整度, 结果致使有些孔的光路被遮挡住了, 进而相关数据直接被判定作废。最后, 这件事使他认识到, 微板法对于实验习惯以及细节的关注程度, 远远超过传统方法。
公司内部对这个方向也有争议
老王并非独自在战斗, 然而团队之中并非所有人都看好微板法, 他的同事老李觉着传统方法虽说速度稍慢些, 可数据稳定, 客户也予以认可, 何苦去折腾呢。老李在实验室工作了将近二十年, 经验颇为丰富, 不过同时也有点固执。他俩在项目启动会上吵了一架。老李认为微板法的重复性难以确保, 特别是碰到高脂血症或者溶血样本的时候, 或许会出现问题。老王实际上自己也担忧这一点, 可他明白公司的发展方向不能仅着眼于当下。他背着他人跟我讲, 他们所在公司在本年度承接了若干高校的大额订单, 与之合作的另一方明确表明要有高通量的检测方案才行, 而传统办法根本无法满足交付所需的时间要求。要是不进行转型的话, 订单就会流向竞争对手那里。故而老王下定决心, 哪怕面临困难也要奋力向前, 就算可能遭遇挫折也要把这条路探寻成功。
第一次做微板法生化检测，数据惨不忍睹
今年三月, 项目正式启动, 地点是在老王他们公司位于苏州工业园区的实验室。老王依据厂家提供的标准操作规程, 采用微板法检测了一批临床样本里的总蛋白以及葡萄糖。结果出来后, 他整个人完全懵了。标准曲线的相关系数仅仅只有0.89, 远远低于预期的0.99以上。样本复孔之间的变异系数超出了10%, 有些孔居然测出了负值。老王将板子拿到读板机上反复进行检查, 发觉有几个孔的底部存在气泡, 另外一些孔的液体蒸发得较为厉害, 致使体积不一致。过后他归纳表示, 微板法针对操作环境里的湿度, 温度, 加样速度均存有要求, 并非如传统比色杯那般“坚韧”。那次失利致使老李愈发坚决了反对观点, 团队士气亦遭受了极大的影响。老王在那段日子压力颇大, 夜晚常常失眠, 然而他并未放弃, 而是将失败的缘由逐一记录了下来。
找到了关键问题，开始逐个攻克
老王耗费了大约两周时长, 将全部有可能对结果产生影响的因素罗列了一份清单, 接着逐一项去进行优化。首先是加样方面, 他更换使用了多通道移液器, 而且预先用样本对枪头进行润洗, 以此减少挂壁情况。其次是反应条件，他对孵育温度作出调整, 从室温转变为37摄氏度的恒温水浴, 与此同时缩短了反应时间, 防止液体出现蒸发现象。最为关键的一点是, 他对微板法的校准流程予以改进。传统方法一般仅仅做一次空白校准, 然而老王发觉微板法的每个孔之间由于位置存在差异, 背景吸光度并非完全一样。他做出决定, 要引入一种名为“板内空白校正”的机制, 在每一块板子之上设置独立的空白孔, 并非简单地运用同一组数据去校正所有的板子, 这一改动致使标准曲线的相关系数从0.89提升至0.97, 虽说还未达到理想状态, 然而已有了明显的改善, 老王把这些改进撰写成了操作规范, 发送给团队当中的每一个人, 强制大家予以执行。
老李的态度也发生了变化
数据呈现出逐渐变好的态势, 老李对于此事的态度开始出现松动, 在四月中旬的时候, 老王拿取了一批已知浓度的质控样本, 采用改进之后的微板法再次进行了检测, 其结果与传统方法相比较而言, 偏差被控制在了3%以内, 与此同时通量提高了整整四倍之多, 老李亲自对数据进行了复核, 沉默了较长的一段时间, 随后轻轻拍了一下老王的肩膀说道你小子还真行, 这件事情使得团队内部的矛盾缓和了许多, 实际上老李并非绝对反对新技术, 他全然是一个对数据格外负责的人, 只要你能够凭借结果来表明情况, 他自然的会改变原本持有的看法。从那之后, 老李同样着手主动钻研微板法的细微之处, 甚至于在加样速度把控还有板子封膜的挑选方面, 给老王给出了好多具有实用价值意义的建议。
真正的考验来自一批复杂的临床样本
五月上旬之际, 老王他们领受了一项紧急任务, 得针对一批源自合作医院的肝病筛查样本开展生化检测。这批样本里有好些是存在黄疸以及溶血情况的, 运用传统方法去处理均颇为棘手, 微板法更是在基质效应方面遭遇挑战。老王心里明白, 要是此次搞砸了, 项目极有可能会被公司予以叫停。他预先作了充足准备: 将每个样本都实施了预稀释, 设定了多个不同的稀释倍数；于板子上增添了内控孔, 对检测进程进行实时监测；还特意安排了一个人负责记录每块板子的上样时间、温度以及湿度。即便情况是这样, 第一次进行检测得出的结果仍旧是不太理想, 存在着几个样本, 其胆红素检测的数值和医院所给出的参考数值之间相差的幅度很大。老王并没有着急去推翻这些数据, 反而是认真细致地去排查其中的原因, 最终发现是溶血样本里面的血红蛋白对显色反应产生了干扰。他对检测波长做出了调整, 并且加入了一个针对样本空白的校正步骤, 在重新进行测试之后, 偏差降低到了能够被接受的范围之内。
微板法的优势终于体现出来了
这次实战过后, 老王对微板法的看法彻底改变了。他讲, 倘若是用传统方法去做那一百多个样本, 起码得耗费两天时间, 并且过程里要反复清洗比色杯, 人极易因疲劳而出错。然而微板法仅仅用了不到四个小时便完成了所有检测, 并且数据的一致性以及可追溯性都比传统方法更佳。老王特意提及, 微板法所生成的原始数据全都保存在读板机的电子文件之中, 后续要是需要复核或者进行统计分析, 直接从电脑里调取出来便可, 无需翻阅纸质记录。这一点于应对客户审计之际, 以及实验室认证之时是极具用处的, 他们公司后续承接的若干大订单, 当客户对实验室予以考察时, 针对微板法的数据管理模式均给予了认定好评, 老王讲, 现代实验室越发注重效率及数据的规范性, 而微板法恰好吻合了这两项需求。
踩过的坑，变成了一套可复制的方法
到六月初时, 老王他们已然积累起了一整套微板法生化检测的操作经验, 从耗材挑选、加样窍门、反应条件择优, 到数据校准和异常值处置, 全都有着详尽的操作规程以及相应的预案, 其后老王将这套内容汇编成了内部培训资料, 而后公司决定在下半年朝着所有研发与质检部门去推行, 老王自己都未曾料到, 当初勉强接手的一个项目, 如今竟成了公司在技术层面的一张名片, 他跟我说, 每项新技术刚步入实验室之际, 都会遇见各式各样的质疑与阻力, 这实属正常。在于关键之处, 是你愿或者不愿意去花费时间, 将问题究竟出在什么地方搞清楚, 并非一遇上困难, 就朝着老路退回。针对微板法生化检测这事, 说到底, 考验的并非设备的好坏, 而是操作者的精细化思维, 以及系统化解决问题的能力。
如果一定要我总结几点经验
这半年多来, 老王那儿最重要的体会, 他让我给写下来, 我觉着吧, 对于那些正考虑采用微板法的人而言, 这些体会应该是挺具备参考价值的。其一, 千万别盲目迷信标准操作规程。厂家推出的SOP乃是基于理想状况之下的, 然而你所在实验室的环境、试剂的批号以及操作人员的习惯, 这些都会对结果产生影响, 故而务必要依据自身实际情况来予以优化。其二, 质量控制这一块儿可不能节省。微板法由于反应体积较小, 微小的误差便会被放大, 所以每一块板子都得设置独立的内控以及空白孔, 绝不能偷懒。其三, 团队之间的配合是非常重要的。再厉害的一个人也难以独自包揽全部事务忙碌得过来, 需将操作分解成具备标准规范的步骤, 以使每个人都能严格依照流程行事。第四点, 数据记录应当实现电子化。微板法在天然层面适合与电子化的数据管理系统相互配合, 切不可浪费掉这一优势。老王讲道, 这些经验皆是通过经历挫折换来的, 期望能够助力看到这篇文章的人减免一些付出。
