一次从崩溃到从容的转变
去年的春天时节, 老张, 也就是我的朋友, 差一点就将他所主要从事的基于细胞株的药物筛选工作的实验室给关闭停止运营了。老张身为一家生物公司的研发主管, 在手底下管理着十几号人员。平常的时候，他看起来是相当稳重的。然而, 就在那天半夜时分, 他给我打来了电话, 其声音都处于颤抖的状态说道：“完了, 有三条细胞株都遭受污染了, 历经三个月所获取的实验数据全部作废了。”。
那时, 我的内心猛地一沉, 老张所在的公司规模不算大, 经费向来就十分紧张, 此次一下遭受几十万的损失, 不管是谁都会陷入崩溃状态, 可出乎我意料的是, 半年过后, 他不但没被开除, 反而在公司里摇身成为了“救火英雄”, 就连老板都给他增加了薪资。这期间究竟发生了什么事情呢? 今天, 我要将老张踩过的坑以及翻盘的办法掰开、揉碎了讲述给你听, 等你看完之后, 大概就会明白, 为何有些人进行细胞株实验时总会遭遇失败, 而有些人却能稳如泰山。
细胞株为什么总是莫名其妙出问题
那些最早被老张碰到的问题当中, 有一个是细胞株的稳定性, 他所采用的那一批细胞, 在前几代的时候运行状况良好皆不出差错, 一旦行进至第十代便开始呈现出生长速度逐渐减缓、形态逐渐变圆的态势, 老张原本认为是培养基方面存在问题, 于是更换了三家不同的供应商, 然而最终呈现的结果却是, 本该出现问题的地方依旧出现了问题。
后来, 他去查阅了资料, 这才知晓, 好多细胞株在长时间传代进程当中, 会由于染色体畸变或者表观遗传改变, 进而失去原本所拥有的特性。这可不是培养基能够解决的情况, 而是细胞自身在发生老化。那段日子里, 他天天都泡在实验台前, 目不转睛地盯着显微镜去看, 结果整个人瘦了足足一圈。
如何鉴别细胞株的质量好坏
踩过第二个大坑的老张, 不清楚该如何去看细胞株的“底细”。以往他都是直接从渠道商那里购买, 只要对方给予一份COA（分析证书）, 他便信以为真。有一回, 他获取了一批号称具备高活性的细胞株, 然而做出来的数据却与文献不相契合, 经过反复验证之后才发觉细胞已然被杂细胞污染了。
随后, 老张变得乖巧起来, 弄了一套用以鉴别的流程。首先, 在拿到细胞株之后, 务必要去做STR（短串联重复序列）鉴定, 以此来确认细胞的身份不存在张冠李戴的情况；其次, 运用支原体检测试剂盒去排查污染, 这一步骤有很多人会选择跳过, 然而恰恰是出现失误的重灾区；最后, 开展细胞生长曲线以及标志物表达验证。老张跟我讲, 经过这三个步骤的操作, 基本上能够把九成有问题的细胞筛选出去。
细胞株传代的关键步骤不能省
以前老张传代特别随意, 认为只要胰酶消化时间大致相近便可行。结果有一回, 他为了赶进程, 把消化时间拉长了三十秒, 细胞直接就“飘”起来了, 整瓶细胞被胰酶侵蚀得惨不忍睹。那次之后, 他每次传代之前都会先瞧一遍操作清单, 诸如:
消化前用PBS（磷酸盐缓冲液）洗两遍，去掉残留血清；
胰酶要预热至37度, 将消化过程置于显微镜下进行观察, 一旦看到细胞间隙变大, 便立刻终止。
吹打时动作轻柔，避免产生气泡损伤细胞。
看起来这些细节是琐碎的, 然而老张讲, 细胞株进行传代如同养育孩子那般, 只要你有马虎一回的情况, 那么它就有可能给你呈现出不好的态度。
细胞株污染后的应急处理方案
年初之时, 老张的实验室再度出现污染事件, 然而此次他并未慌乱。他察觉到培养液变得浑浊以后, 立刻将遭受污染的培养瓶隔离至指定区域。随后, 他运用75%酒精擦拭培养箱的内壁, 开启紫外线并进行两小时的消毒工作。紧接着, 他取出先前备份于液氮之中的种子细胞, 重新复苏之后接种于新的培养体系里。
老张跟我讲, 他能够这般淡定, 缘由在于他平常养成了将“种子细胞”与“工作细胞”予以分开管理的习惯 , 种子细胞专门用于扩增以及冻存, 绝对不会直接应用于实验 , 工作细胞才是用来开展实验的, 使用完毕便丢弃 , 如此即便工作细胞出现了污染, 种子库依旧是洁净的, 最多只是损失两周时间, 不至于需要重新起步。
如何长期保存细胞株
老王近来做了一桩值得夸赞之事: 他将公司以内全部关键的细胞株皆进行了多份额的备份, 放置于截然不同 locations的液氮罐里。他讲这是从同行那里学到的, 鉴于要是液氮罐出现异常状况或者液氮进行了挥发, 那整批细胞极有可能在一夜之间就宣告废弃。他目睹过有人由于液氮罐的盖子未能妥善盖严, 进而导致一个月过后所有细胞全得以解冻, 造成了极为严重的损失。
他采取的做法是, 针对每个细胞株而言, 至少要保存三份, 其中一份放置在主实验室, 一份放置在备用实验室, 另外一份放置在公司楼下的液氮存储站。与此同时, 他为每份冻存管都贴上了二维码标签, 通过扫码便能够看到细胞株的来源、代次、冻存日期以及复苏记录。如此这般, 不管是哪个环节出现问题, 他都能够迅速地找到替代方案。
细胞株实验记录的标准化管理
那个老张当下最为得意的, 乃是他那个实验记录系统, 他往昔是在本子上进行记录的, 而后发觉查找数据比开展实验还要费劲呢, 如今他要求团队采用电子表格, 针对每一个细胞株都单独去构建一个文件夹, 文件夹里头涵盖着:
细胞株来源和证书；
每次传代的日期、代次、操作人员；
每次检测的生长曲线、污染检测结果；
实验数据对应的原始图片。
于是, 一旦某个细胞株出现了状况, 他便能够迅速追溯问题究竟来自于哪一个环节。他们的生物公司也凭借这套记录系统, 获取到了几个大客户给予的质量审计认可。
老张现在的状态
前些日子我和老张一块儿用餐, 他整个人呈现出来的状态绝对是截然不同了。以往的时候他总是紧锁眉头满脸愁苦, 如今却总是三句话不离“细胞株管理实际上并非那般困难”。他们公司于去年期间, 因细胞株遭到污染致使的实验报废率, 由百分之三十下降到了百分之五以下, 仅仅计算节省下来的试剂以及人力成本, 就足以让他购置一台全新的设备了。
老张讲, 当去做细胞株实验时, 最害怕的并非是技术存在难度, 而是那种认为“差不多就可以了”的想法。好多出现问题的情况皆是源于细节没有予以留意, 像是少进行了一次清洗, 多消化了几秒时间, 又或者是偷懒并没有去做污染检测。这些看起来并不起眼的小事情, 积累起来便会造成几十万的损失。
倘若你同样正与细胞株进行着接触, 不妨思索思索自身是否在某些环节方面也处于“大致相同”的状况了。老张所拥有的经历向我们传达出这样的信息, 将每一个步骤都切实做到位, 比其余任何事情都更具效用。
