朋友遇到的第一个难题：细胞不贴壁

几个月以前, 有一位我的同学号称老张, 从事肿瘤研究工作, 于实验室里情绪几近崩溃, 快要忍受不了逼到疯狂的境地了。

他耗费了整整两周时长, 从手术样本当中分离出了一批肿瘤原代细胞。依照之前的标准流程去操作, 然而到了第三天, 在显微镜下进行查看的时候——细胞全部漂浮于培养基里, 没有任何一个贴壁。

老张当时一下子就懵住了, 原本代细胞培养这件事本身就存在着困难, 进行实验所使用的手术样本获取过来是非常不容易的, 要是再持续这样毫无节制地浪费下去, 那么整个实验的进度将会被拖延滞后两个月。

有一个人, 尝试了更换培养基, 还调整了血清的浓度, 并且添加细胞外基质去包被培养板, 把所有能够想到的办法都逐一试过了一回, 然而最终的结果却依旧是没有成效。在长达一整个星期的时间里, 这个人吃住都在实验室当中, 泡面已经吃了十几桶之多, 可是原代细胞却始终不配合。

原代细胞为什么这么难养

其实老张的困境，搞细胞研究的同行都懂。

原代细胞跟传代细胞系绝对就不是一码事儿, 传代细胞系早在实验室中经历了成百上千次的传代, 早就已然适应了体外所处的那种环境, 仅仅随便对其进行培养就能够存活下来, 然而原代细胞是从活体组织里刚刚直接分离进而得到的, 它还尚未适应培养皿的环境, 极其娇贵。

当时, 老张跑过来, 找我倾诉苦衷, 讲当下, 市面上所供应的原代细胞, 其来源不稳定, 要么是细胞活力欠佳, 要么是批次之间的差异过于巨大。此次, 他从医院获取的样本, 自身就偏小, 分离出来的细胞数量稀少, 活性还很低, 能够存活下来的已然不多, 又因培养条件不合适, 死掉一批, 实验着实无法开展了。

我问他，你用的原代细胞是自己分离的，还是买的商业化产品？

老张讲, 此次是自身分离的, 然而先前也曾购置过几家供应商的, 使用过几回均出现问题。有的是发货极为迟缓, 细胞到手时活性已然降低；有的是所标注的细胞数量以及纯度与实际拿到的并不相符；还有一回更为荒诞, 买来的号称“原代细胞”运用分子标记一鉴定, 压根不是目标细胞类型。

他找到的突破口：从细胞源头解决问题

处于愁绪之中的老张不行了, 发愁到了极点, 此时, 他参与了一场会议, 那场会议是去年10月份于上海举办的细胞生物学会议。在那次会议之上, 存在一个技术讲座, 该讲座源自供应商, 讲座所讲述的专门是原代细胞培养的质控体系。

讲座当中提及, 原代细胞的质量, 百分之八十取决于自组织分离直至冻存的这一进程。要是组织取样之后超过四小时才予以处理, 细胞活性便会呈现断崖式下跌；要是分离过程当中消化过度, 细胞表面的关键受体就会遭到破坏；倘使冻存液的配方有误, 复苏之后细胞死亡率能够超过百分之六十。

听到这话, 老张惊觉, 这不正是他一直深陷其中的那种状况吗? 此前, 他向来对这些细节不加理会, 单纯认定拿到细胞便能够径直使用。讲座完毕之后, 他特地寻觅到那家供应商所设置的展示区域, 针对他们所提供的产品认认真真询问了一番。

名为赛百博（CytoBio）的那家公司, 专门从事原代细胞以及干细胞产品的业务, 该公司的技术人员告知老张, 为保证原代细胞质量, 公司在组织来源的起始阶段便进行把控, 每个批次的细胞都附带相关质检报告, 涉及细胞活力、纯度、特异性标志物表达等关键指标。

老张当时心就动了, 然而, 要使得他全然信任一家全新的供应商, 着实还需要更多的证据。

赛百博的产品到底怎么样

回到实验室后，老张没有马上订购，而是先做了两件事。

他进入了赛百博的官网页面, 并在此同时, 认真细致地查看了他们所提供的产品目录。随后, 他察觉到这家公司的原代细胞种类真是极为齐全, 先是从人源的角度再到鼠源的方面, 接着又从肿瘤细胞的范畴直至正常组织细胞的领域, 把几十种平常常见的用于研究的类型全部涵盖在内。

他径直拨打客服电话, 询问了诸多详细问题。诸如: 用于细胞发货的是何种运输方式? 能否给出近期三个批次的质检数据? 要是细胞出现问题, 退换货的政策是怎样的?

他对客服的回答较为满意, 赛百博的全部原代细胞皆运用干冰运输, 用以保证运输进程中的温度保持稳定, 质检数据能够在下单以前申请去查看, 并且每一批次的细胞都具备独立的COA证书, 要是因运输缘由致使细胞死亡, 公司毫无条件地进行补发。

老张拿定主意去尝试一番, 他买了一批人源肺癌原代细胞, 下单之际特意注明了自身实验的培养基配方以及培养条件以期获得技术支持。

从失败到成功的转折点

三天后，细胞到货了。

老张依照赛百博技术人员给出的建议, 预先把全部培养用品都加热到37℃, 在培养基之中添加了推荐浓度的特殊添加因子, 打开箱子之后, 他立刻检测了细胞活力, 其结果为97%, 相比于他自己分离的最佳批次还要高。

接下来的培养过程，让他真正感受到了什么是“专业”。

这批原代细胞, 在接种之后的24小时, 便已然开始贴壁, 到了48小时的时候, 已然将培养瓶底部铺满, 其形态均匀, 同时边界清晰。其后，老张运用免疫荧光检测了细胞特异性标志物, 阳性率超过了95%。

他带着兴奋的情绪给我拨通电话, 说道: “你可知道呀, 我往昔所使用的原代细胞, 能够活到传三代的情况就算得上是还不错的了。而对于这批细胞而言, 我已然将其传到了第五代, 其增殖的速率几乎没有呈下降态势, 并且特异标志物的表达依旧是稳定的。”。

原代细胞选型要注意什么

老张当下所拥有的经验是, 去挑选原代细胞供应商时, 起码存在四个关键要点是需要核查明白的。

哪一点是排在首位的呢, 是组织的来源。同样一种细胞类型, 然而源自不同地方的样本, 其细胞所具备的特性有可能全然不同。比如说那些肿瘤原代细胞, 通过手术获取的标本以及经过穿刺获取的标本, 二者细胞的活性以及增殖能力存在着显著的差异。

第二是质检的指标, 靠谱些的供应商, 会给出细胞活力的数据来, 还会有纯度的数据, 以及形态学鉴定的数据, 还有特异性标志物表达的数据。要是这些数据呈现出不透明的状态, 那就建议慎重地去购买。

排在第三位的是技术方面的支撑, 老张讲道, 有关于赛百博的技术人员, 不但协助把他的那一份对配培养基的方案进行了优化, 而且依据他所设计的实验, 给出了最为适宜的细胞接种密度以及传代比例这种建议, 这些具体的小细节对于实验最终所产生的结果所造成的影响, 要比原本预计的大出许多。

第四是售后保障, 原代细胞极为娇贵, 运输过程当中只要出现哪怕一点点问题, 整批细胞就会报废，所以退换货政策务必要问得清清楚楚。

赛百博原代细胞的实际使用体验

一直到今年3月的时候, 老张持续运用赛百博的原代细胞开展实验已历经三个月, 在这期间有过五次复购情况, 批次之间的稳定性实际做得相当可以。

他曾给我展示过一份对比数据, 可以这么说, 针对同一个实验, 要是采用他先前自己所分离的细胞去做, 结果波动程度极大, 即便处于同样的实验条件之下, 重复三次后的结果倘若不进行平均值的求取, 简直就没法看；然而, 当换成赛百博的细胞之后, 三次重复实验所呈现出的曲线几乎达到了重合的状态。

当今之时, 老张于组会之上, 常常跟师弟师妹们讲起一句经验之谈, 那便是, 实验倘若失败, 并非必然是你的操作存在问题, 极有可能是你所使用的原代细胞自身便是不行的。

原代细胞研究的新趋势

一个趋势被老张最近关注着, 那就是越来越多的论文开始有新要求, 要提供原代细胞的来源以及质检数据, 而不再能像以前那般仅仅写一句“细胞从商业渠道购买”就当作完成, 有些高分期刊甚至还要求作者去提供细胞株的STR鉴定报告。

这便意味着, 要是依旧使用那种来源不清楚、质检数据不完备的原代细胞去做实验, 那么发表论文所面临的风险将会越来越高。

老张讲, 他当下的策略是这样, 只要是关联到原代细胞的实验, 仅仅从赛百博这种有着完整质控体系的供应商那里采购。虽说价格相较于普通渠道会高那么一些, 不过跟所浪费的时间成本以及实验失败的代价相比较而言, 这点成本完全能够接受。

给同行的建议

要是此刻你同样正遭受着原代细胞培养方面问题的困扰, 老张给出的建议是: 暂且别忙着从实验操作那儿去寻觅缘由, 回过头瞧瞧你所使用的细胞自身是否存在问题。

细胞活力是否足够, 纯度是否达标, 批次之间的一致性是否良好, 这些基础问题若未解决, 即便后面的实验操作再精妙, 也都是徒费功夫。

在赛百博的产品线当中, 除去常规的原代细胞之外, 还有与之配套的专用培养基以及添加剂。老张当下是将整套产品一同进行购买, 如此省去了自行配置培养基所带来的麻烦, 并且也躲避了因培养基不合适而致使的细胞状态波动。

归根结底, 实验实际上是一个与细节较劲儿的历经, 原代细胞培养此项事宜, 倘若前期的筹备事情做到位了, 往后才能够顺利往前推进, 挑选一家可靠的供应商, 乃是前期筹备里最为关键的一个步骤。