我朋友老张，差点被一个试剂盒整崩溃了

曾经在实验室相识的老张, 是相伴已久的老友, 投身免疫检测领域将近十年, 其技艺精湛, 操作遵循规范, 记录明晰无误, 就连实验室主管时常将他的数据用作模板。然而就在上个月, 他险些因一个ELISA试剂盒, 致使当月全部实验数据作废。

那此事得从他承接了一个全新项目开始讲起, 在今年三月底的时候, 他们那个小组需要去开展一场大规模血清样本的筛查工作, 客户催促得十分紧迫, 时间压力堪称极为巨大, 老张依照往常一贯的习惯, 径直直接继续采用之前曾经合作过的供应商, 继而下达订单订购了一批ELISA试剂盒啦, 他觉得只要操作的手法不存在相关问题, 那么结果便不会差到哪里去的。

为什么我用了同一款试剂盒，这次结果总不对？

试剂盒到货之后, 老张依照既定步骤推进流程, 第一天开展包被工作, 第二天进行加样操作, 第三天完成显色环节, 每一个步骤均严格依照说明书予以执行。然而等到读取板值的那一日, 他愣住了, 因为标准曲线得出的R值仅仅只有0.92, 而复孔相互之间的变异系数激增至15%以上。

老张起初觉得是自身的加样枪未校准, 于是重新校准了一回, 更换了新的枪头, 而后又进行了一轮操作, 然而结果依旧是原先那般。他进而怀疑或许是洗板机出现了故障, 随后把其拆下来清理管路、更换洗液, 如此折腾了好长一段时间, 到了第四天再次进行测试, 数据仍旧糟糕透顶。

听上去, 他在跟我打电话之际, 声音已然是沙哑的状态了, 他说道: “你瞧瞧, 我都忙活这么多年了, 为何就连个试剂盒都没办法搞定呢? ”随后, 我对他提出要求, 让他把试剂盒的批号发送给我瞅一瞅, 紧接着, 我又向他询问了关于这批样本的来源情况以及保存的条件究竟是怎样的。

ELISA试剂盒批次差异，到底有多大影响？

问题出在了批次方面。老张此次所购买的试剂盒, 和他之前用过的相较, 虽说属于同一品牌、同一货号, 然而生产批次却是不一样的。我对那批产品的质控报告展开了查询, 发觉其中包被抗原的浓度相较于上一批降低了将近20%。这种类别的差异于出厂检测当中或会被判定为合格, 可是对于老张这般有着高精度需求的实验来讲, 影响真的是过于巨大了。

ELISA试剂盒的关键所在是抗原与抗体相结合的特异性, 以及灵敏度, 一旦涉及包被浓度出现波动, 那么标准曲线就会产生偏移, 样本的OD值所对应得出的浓度自然而然是不准确的。老张所使用的依旧是那套陈旧的校正曲线算法, 并未进行批次之间的归一化处理, 数据当然是对不上的。

我向他提出建议, 建议他马上和供应商取得联系, 要求供应商给出新批次试剂盒的详细质控参数, 与此同时, 我还向他建议去做一次内部验证实验, 这个实验是用同一组已知浓度的质控品, 分别在新旧两个批次的试剂盒上进行测试, 之后要对比查看差异范围。

换供应商还是调整实验方案，哪个更靠谱？

老张依照我所说的去做了, 最终证实了我的判断, 何为这一结果呢就是新旧批次之间的那个OD值差异处于10%到25%之间, 这根本就是不在具备可比性的范畴之内。他那时其实遭遇面临着两个可供选择的选项, 其一便是把这一批次的试剂盒完全全部退掉, 再重新订购订一批跟之前保持一致相同的批次；其二则是去调整改变实验方案, 利用启用新批次的试剂盒再次重新建立构建标准曲线呀等, 而后把之前已然已经跑完的样本全部通通都去重新再做一遍。

他整整纠结了一天, 退换货的话项目就要至少延期一周, 这在客户那边根本没法交代, 要是选择去重做样本, 实验室的耗材预算就一定会超支, 而且几个人加班加点所付出的精力也全都白费了, 最终他权衡后选了个折中办法, 把没拆开过的试剂盒退回去, 用新批次跑完剩下的少量样品, 同时向供应商申请了一份额外的用于内部校准的质控数据包。

终于, 在五月中旬这个时间点, 那个决定促使他把数据拉了回来。后来, 当他跟我进行复盘的时候讲, 最大的教训便是“不可以迷信同一个品牌的同一款产品, 而ELISA试剂盒的批次一致性才是实验稳定性的关键所在”。

如何避免再踩ELISA试剂盒的坑？

经历此次折腾后, 老张如今选试剂盒的流程全然改变了, 他要求供应商预先提供起码三个批次的质控数据, 涵盖批内变异系数、批间变异系数、线性范围以及灵敏度, 他还自行构建了一个小型数据库, 每当进一批新的试剂盒时, 先拿一组标准质控品跑一轮, 将OD值、CV值、R值全都记录下来存档。

六月刚开始的时候, 他们这个组又承接了一个全新的项目, 在这一回, 老张专门找来了三个不同的供应商, 让它们各自提供样品, 经过横向进行对比之后, 才进行下单操作。他讲现在挑选ELISA试剂盒, 就如同买车那般, 绝不能够仅仅只看品牌, 还得留意批次, 关注一致性, 重视售后技术支撑。

有件事特别出乎他的意料是, 他换了一家供应商以后, 那家供应商不但给出了完整的质控报告, 而且还派遣了一个技术支撑力量赶赴现场, 协助他们完成了两轮内部验证工作。老张讲, 这才是符合正规商业运作模式的表现, 依靠数据来进行阐述说明, 完全不搞虚假不实那一套。

选对ELISA试剂盒，实验才不白做

其实老张所经历的事情是颇具代表性的, 不少从事实验工作的人员都认为, 只要自身操作符合规范要求, 那么不管购买何种试剂盒都能够投入使用。然而事实上, ELISA试剂盒在批次稳定性方面、包括其包被工艺以及质控体系等, 是直接对实验数据的可重复性起着决定性作用的。哪怕你加样精准度极高且洗板特别干净, 但若试剂盒自身存在问题, 那所能进行实验的一切努力也都将是徒劳无功的。

他如今见人就讲这么一句话: “挑ELISA试剂盒时, 别仅瞅价格跟品牌, 先跟供应商索要三个批次的质控数据, 拿自身的质控品去跑上一轮验证, 等数据合格了之后再去下单。”这话听起来挺简易, 然而能够做到的人真不多。

要是你同样正为实验数据呈现出不稳定的状况而发愁, 那不妨先去核查一下手里所拥有的试剂盒的批次, 说不定问题之处便是在那里呢。