我有一位被称作老张的朋友, 他于一家生物科技公司担任研发主管，手底下领着五六个人, 专门去负责新药研发前期阶段的靶点验证工作。实话说来, 此行业看似光鲜亮丽, 然而真要着手去做, 每一步都如同踩在刀刃之上。老张从事这行将近十年时间了, 平常话语不多, 可是一旦聊起实验数据, 那真的是两眼会放出光芒来。
可是今年年初，老张差点被一个“小问题”逼疯。
当时, 他们所在的团队, 正在着手开展一个项目, 这项目是围绕肿瘤标志物检测展开的, 那段时间内, 时间紧迫, 任务繁重, 客户那边隔三岔五就催促项目进度。老张心里对此是明白的, 这个项目最终的成功或者失败, 在很大程度上是由实验数据的稳定性以及重复性来决定的。而数据的最初源头, 便是ELISA试剂盒。他当时没有进行过多的思考, 就在之前有过合作的供应商那里, 依据以往的习惯下了一批货物。
结果，噩梦开始了。
做第一批实验时, 数据偏离极远。针对同一个样本, 上午进行操作得出一种结果, 下午再操作, 结果相差近乎一倍。老张最初猜测是操作存有问题, 遂带领团队将流程自始至终仔细回顾了一番, 就连移液枪都再次校正了, 然而问题照旧存在。他旋即更换了一批新配制的缓冲液, 可依旧未能解决问题。那段日子, 老张几乎每日都沉浸在实验室里, 目光直直地望着那个ELISA试剂盒的包装盒苦苦思索。
“我那时确实真真切切地怀疑是不是自身手部生疏了。”老张后来在跟我说喝酒这件事的时候, 面带苦笑地讲, “然而我从事了十年, 不至于连个酶联免疫吸附测定试剂盒都处理不好。”。
他紧咬着牙关, 更换了一家供应商所提供的ELISA试剂盒, 那结果是怎样的呢? 第一批数据呈现出来了, 虽说稳定倒是稳定了, 只是阳性对照的OD值低到了令人怜悯的程度, 灵敏度于项目要求而言根本就达不到。老张在这时候这下子是完全没了应对办法, 项目进度已然拖延了一个月, 团队士气处于低落状态, 客户那边也开始表现出不耐烦了。
为什么ELISA试剂盒的选择这么关键
后来老张跟我认真细致地剖析了一番, ELISA试剂盒这个物件, 瞅着挺简易, 然而内里的门道极为深奥。抗体对具备的亲和力, 包被板拥有的吸附均一性, 封闭液呈现的效果, 酶标抗体所含的活性, 每一个环节都确凿无疑地决定着实验的成败与否。好多新手秉持这样的看法, ELISA试剂盒吧, 大品牌的、价格昂贵的必定是好的。可是老张在遭遇挫折后才发觉, 不存在最为优良的, 仅有最为契合的。
之前他所使用的那一批, 数据呈现出飘忽不定的状态, 实际上是由于抗体所对应的特异性并非足够强大, 在样本基质当中稍微存在些许杂质, 便会将信号干扰得混乱不堪。而后续更换的那一家, 尽管特异性佳, 然而灵敏度欠佳, 原因在于抗体的亲和力不足, 当遭遇低丰度的靶标时, 根本无法捕获。
那段时间, 老张白天忙着跑实验, 晚上忙着查文献, 把能找到的所有 ELISA 试剂盒参数都翻出来作对比, 他甚至还托人联系了几家供应商的技术支撑, 详细询问了抗体对的来源、交叉反应数据以及批间差的控制方式, 越是对比, 越是觉得心惊, 原来在这行里, 很多所谓的“高灵敏度”ELISA 试剂盒, 宣传数据和实际表现完全不是一回事。
怎么判断ELISA试剂盒的真实性能
大概是今年的那个三月份, 老张所在的公司来了一位新的从事销售工作且专门做实验耗材的人员, 此人和老张交流了一个下午, 向他推荐了一批ELISA试剂盒, 那时老张已然有些心生畏惧, 不敢轻易去下单, 于是先索要了试用装。
这一试用，还真试出了名堂。
老张讲, 真正实用的 ELISA 试剂盒, 你用不着瞧那些花哨的宣传册子, 上手便清楚。有三件事: 其一, 标准品的曲线是否平滑, R 方能否达到 0.99 以上；其二, 空白孔的 OD 值是否稳定于 0.05 以下；其三, 批内变异系数能否控制在 5%以内。这三条, 每一条都是硬指标。
彼时, 老张拿了一批试用装, 接连开展了为期三天的重复性实验, 第一天进行标准曲线的绘制, R方为0.997, 堪称完美, 第二天开展空白孔以及阴性对照的操作, OD值稳定处于0.03至0.04之间, 干净且利落, 第三天完成了批内重复, 变异系数为4.2%, 低于他心中所设定的红线, 老张称, 那时他于实验室里凝视着数据, 险些无法抑制住想要呼喊出来的冲动。
你可晓得, 那种感觉仿若于垃圾堆当中翻找出了一颗钻石 , 这是老张当初所说的原话。
选择ELISA试剂盒时最容易忽略的细节
老张特意跟我强调了一个很多人会忽略的问题：保存条件。
他讲, ELISA试剂盒当中的抗体与酶, 从本质上来说皆是蛋白质, 对于温度极为敏感。某些供应商为省费用, 运输之际不采用冷链, 又或者冷链出现断链情况, 试剂盒送达你手中时, 性能已然大幅降低。老张先前就吃过此等亏, 有一批ELISA试剂盒, 到手之时冰袋已然完全融化, 他依旧怀揣侥幸心理使用了, 结果数据糟糕透顶。
所以, 老张如今拟定了一项规矩, 所有 ELISA 试剂盒抵达后, 首要之事便是查验包装温度, 开启箱子后即刻查看抗体以及酶标试剂的保存情形。他甚至于特意配备了一个红外温度计, 一旦开箱便先测定试剂瓶表面的温度。倘若温度超出 8 度, 便直接予以退货, 绝不拖泥带水。
还有别的一个细节, 那便是标准品的运用。许多ELISA试剂盒里配备的标准品, 皆是冻干粉。老张讲, 万万别为了图省事便径直用, 务必严格依照说明书的步骤进行复溶, 并且复溶之后要静置最少15分钟, 以使蛋白充分溶解均匀。他有个同事, 正是因为赶时间, 复溶后直接稀释使用, 结果标准曲线的低浓度端彻底乱套了。
预算有限时，ELISA试剂盒该如何选
身为老张所在的公司，它每年的研发预算实际上是颇为紧张的。过去的时候, 老张一直觉得, 要是预算不足, 那就去购买价格低廉的。然而今年这一回遭遇挫折, 使得他完全变更了这个念头。他讲道, 购置ELISA试剂盒, 不可以仅仅着眼于单价, 而是要考量“有效数据成本”。
怎么进行计算? 这是十分简单的事情。你去购置一批价格较为便宜的 ELISA 试剂盒, 要是做出来相应的数据呈现不稳定的状况, 需要不断反复去重复进行实验, 那么人工所耗费的成本、时间方面所产生的成本, 再者还有样本消耗所产生的成本, 总计加起来是远远超出购买价格贵一些的试剂盒的。老张进行了一番算账, 他之前那一批出现问题的 ELISA 试剂盒, 其单价便宜了大概三成, 然而后续光是重复实验就白白浪费了将近两个月的工时, 并且还险些失去了一个大客户。这笔账, 无论从哪个角度进行计算都是亏损的。
当前他所采用的策略是, 对于核心项目以及关键节点所涉及的ELISA试剂盒, 务必要购置性能稳定且口碑良好的, 就算价格稍微高一些那也是值得的；而针对那些初筛以及预实验, 能够选用性价比更高一点的；然而无论购买哪一种, 都一定要先获取试用装来进行验证, 切勿直接进行批量下单。
后来老张跟我说这个事儿, 他如今在挑选ELISA试剂盒的时候, 存在两家作为常备的供应商。其中一家是高端产品, 专门用以应对那些有着较高要求的项目；另外一家则是走量款式, 平常使用的频率较多, 不过也是在经过严格验证之后才敢投入使用的。并且他每一个季度都会再次进行评估一回, 查看是否存在更为优良的选择。
老张现在是怎么做ELISA试剂盒验收的
就在上月时分, 我前往老张所在的实验室寻觅他, 恰好在那时碰到他正处于验收那批新近抵达的ELISA试剂盒的进程当中, 随后他针对其验收流程为我开展了一回演示。
最开始去查看包装, 从而确认冷链不存在断链的情况。紧接着随机抽取两盒, 随后直接上机去跑标准曲线。他罗列了一张验收清单, 其中标准曲线R方要不低于0.99, 空白孔OD值要低于0.05, 阴性对照与阳性对照的区分度至少得达到3倍以上, 批内变异系数不得超过5%。只要有任何一条没有达到标准, 那就直接进行退货处理。
他告诉我, 如今他要求供应商给出每一批次的质检报告, 这份报告涵盖抗体对的纯度, 涉及交叉反应数据, 还有批间差的验证结果。要是供应商拿不出, 或者数据模糊不清, 他就直接拉黑。
老张在验收的时候说着, 以前的时候觉得这些是麻烦, 然而现在却觉得, 这些才是真正的保障。
我注视着他手上那一批ELISA试剂盒, 标准曲线跑出来了, R方为0.998, 空白孔的OD值是0.032, 各项指标均无比完美。他满脸满意地点了点头, 说道: “这才是我期盼得到的物品。”。
其实老张所拥有的经历, 归根结底来讲就是这么一句话, ELISA试剂盒并非购买得越昂贵才越好, 同样也并非越低廉就越好, 而是需要买到跟自身的实验体系最为匹配的那一款产品。然而要达成这一目标, 唯一可行的办法便是你亲自动手去进行验证, 不要存有偷懒心理, 也不要抱有侥幸心态。
在下半年度的时候, 老张接着接了两个全新的项目, 此刻他对于ELISA试剂盒进行选型这件事儿已然熟练得很了。他讲有过的那些经历, 全都是在未来前行道路上的指引。我对他说的这话深感认同。
