朋友老张的烦恼：实验数据总是不稳定
去年秋天的时候, 我于北京中关村的一家咖啡馆当中见到了老张, 他是我在北大进行读研期间的同学, 毕业之后一直于一家生物技术公司担任研发主管, 其主攻方向为免疫检测, 那天他满脸愁容, 刚一坐下便开始叹气, 说道: “最近手里所负责的项目陷入滞碍状态了, ELISA试剂盒获取的数据始终不稳定, 重复性糟糕到了极点, 老板每天接连不断地催促。”。
老张所在的公司, 主要从事科研外包服务, 其客户都是大学以及研究所, 这些客户对于 ELISA 试剂盒的灵敏度与特异性有着极高的要求。老张手头目前正在进行的, 是一个检测细胞因子的小鼠模型项目, 然而他更换了好几个不同牌子的试剂盒, 但是最终的结果却都不尽如人意。要么是背景噪音过高, 要么是标准曲线根本跑不出来。最为让人头疼的是, 同一样品在不同批次检测时所测出来的 OD 值竟然能够相差一倍, 像这样的数据交出去的话, 不要说文章发表不了, 就连客户都会直接翻脸。
ELISA试剂盒到底该怎么选？
在那段日子里, 老张差不多将市面上占据主流地位的科研ELISA试剂盒逐一尝试了一番。进口的价格贵得超乎想象, 并且交货周期冗长, 有时等待一个月方可到货；国产的价格较为低廉, 然而质量却良莠不齐, 有些甚至连最为基础的线性关系都无法予以保证。他与实验室的技术员小刘特意耗费了两周时间去开展对比测试, 发觉问题的关键所在位于两个层面: 其一, 抗体的特异性有所欠缺, 其二, 试剂盒的稳定性较差。
你来讲讲, 我们这些从事科研工作的人, 最惧怕的是什么呢? 老张一边慢慢地搅拌着咖啡, 一边向我发问, 花了大量时间, 耗费了许多金钱, 最终却只得到了一堆毫无价值的废数据, 这实属令人最为害怕之事。ELISA试剂盒这类物品, 表面看上去似乎较为简单, 然而实际上其中所蕴含的门道极为繁杂众多。包被这一环节、封闭这一过程、洗涤这一操作、显色这一步骤, 无论哪一个步骤出现了差错, 都是无法行得通的。可是要是试剂盒自身的质量不符合标准要求, 那么无论你怎样去优化操作流程, 终究都是徒劳无功的。
他提及了一个细节, 存在着这样的情况, 有些试剂盒的保存条件标注得不清楚, 在冷链运输的过程当中温度波动幅度很大, 当到达实验室的时候酶标抗体的活性已然下降了, 而在这种情况下这便直接致使信号变弱了, 进而让检测下限无法提升上去。
遇到一款靠谱的科研ELISA试剂盒
转机出现于去年11月, 老张有个在军事医学科学院工作的师兄, 师兄来北京开会, 提到了这件事, 师兄进而推荐了他们实验室使用大半年的一款国产科研ELISA试剂盒, 老张半信半疑地获取了联系方式, 预定了两盒小鼠TNF-α的检测试剂盒。
哎, 你知道吗, 老张当时笑着讲, 说实话那一刻, 其实他当时并没有怀揣着特别大的那种期望。然后, 等到东西一抵达的时候, 他就察觉到有差别。那个包装呈现出特别规范的状态哟 , 每一组试剂竟然都配备了详尽的操作规程说明书呢 , 就连稀释的比例以及孵育的时间, 都标记得明明白白清清楚楚的。最为关键重要的一点是呀 , 试剂盒还附带了一张质控报告噢 , 在那张报告上面, 有本批次试剂盒的批间差以及批内差的相关数据呢 , 而且其CV值, 并全都控制在了5%以内。
他马上安排小刘开展了一组平行实验, 与此同时, 运用他们先前使用过的进口试剂盒以及这款新试剂盒, 对同一个标准品进行检测。结果揭晓的那日, 老张给我发送微信告知: “妥了！新试剂盒的标曲R²值已然达到了0.998, 并且, 三个重复孔之间的差异差不多能够忽略不计。”。
为什么这款ELISA试剂盒更稳定
老张后来特意去对这家公司做了一番了解, 他发觉这么个状况, 这家供应商所提供的科研 ELISA 试剂盒之所以处于一种稳定性状态, 其关键之处在于几个不同的环节, 首先呢是关于抗体的筛选方面, 他们所运用的是那种经过了双重验证之后的单克隆抗体进行配对方式, 以此种方式保障了对于目标抗原具备高度特异性, 其次是涉及到生产工艺这块儿, 他们运用的是低温包被技术以及经过优化处理之后的封闭液配方, 通过这样的方式减少了非特异性吸附情况的发生, 除此之外, 每一批次的试剂盒在出厂之前都会开展严格的质量把控措施, 这里面又有温度冲击测试以及加速稳定性试验等内容, 目的在于确保在运输以及储存的整个过程当中其性能不会出现下降的状况。
老张说, 你可知道呀, 存在着这样的情况, 有些试剂盒的说明书上面所写的检测范围是15.6 - 1000 pg/mL 但实际到了实验室里头, 低浓度点的响应值根本就无法测出来。而这款试剂盒是不一样的这种状况, 它的最低检测限确实能够达到标称值, 并且线性范围很宽广, 节省了我们诸多稀释以及复测的时间。
实验效率大幅提升
用了此款科研ELISA试剂盒后, 老张团队的实验效率显著提升了。以往做一次完整的ELISA实验, 从包被直至读板起码需两天, 期间还得不断反复调整优化条件。如今, 鉴于板子是预包被的, 直接添加样本进行孵育后就能上机操作, 一次完整的检测流程仅需约四个小时。
更为关键的是, 相关数据具有了更好的重复性结果, 可以使得这种状态下被称为老张的人, 不必再持续不断反复去做实验以对最终结果进行验证。在上个月的那段时间, 由他负责的有关小鼠模型的项目得以顺利实现结题流程, 在此状况下客户对于相关数据呈现出相当满意的态度, 并且又签订了三个全新的检测合同。老张进行了一番成本计算得出如下结果: 尽管这款试剂盒单从价格方面来看, 相较于普通国产产品而言要略高一些, 然而由于其在实际使用过程中能够省略掉优化所需要耗费的时间, 并且最大程度减少重复实验，经过综合计算之后实际所产生的成本反而更低一些。
科研ELISA试剂盒的核心是稳定和可重复
如今针对老张来说得出的经验是, 在挑选科研 ELISA 试剂盒这件事上, 不能够单凭借价格来考量, 亦不可盲目迷信进口产品。而关键需要关注这三点: 其一, 抗体所具备的特异性以及亲和力究竟是不是已经历经了严格的验证；其二, 批次相互之间的稳定性有没有相关数据给予支撑；其三, 供应商所提供的技术支撑能不能够做到及时作出响应, 完毕。
上周, 他于微信之上跟我讲道: “如今我给实验室确定试剂盒之时, 都会优先挑选这一家。尤其是针对做时间跨度较长的项目之时, 试剂盒批次之间的稳定性实在是极为重要。要不然你在今天所测出来的结果, 到下个月更换另一个批次便无法测出来, 如此一来整个实验就必须重新去做, 那才真的叫做耽误事情。”。
从去年秋季时的焦虑状态转变到如今这般的从容情形 , 老张所历经的这段历程会使我产生这样的一种感觉 , 那就是去开展科研实验 , 在许多时候并非是技术方面的问题 , 而实则是关乎选择的问题。一款具备可靠性质的科研ELISA试剂盒 ，确实是能够省去诸多并非必要的麻烦。
