PCR实验室最容易忽视的环节,对试验辅料进行质检。PCR实验室的辅料指的是PCR实验中常用的一些辅助试剂和耗材,比如采样管、拭子、离心管、PCR管、吸头、移液器、无核酸酶水和试管架等。
PCR管是用于聚合酶链式反应(PCR)实验的容器,常见的种类包括单管、8联管、12联管等。这些管子根据实验需求和PCR仪的适配性来选择,比如单管适合少量样本检测,8联管是最常用的选择,而12联管则提供了更高的灵活性和性价比。PCR管的体积有0.1ml和0.2ml两种,其中0.1ml管由于死体积小、减少水蒸气影响、降低挂壁冷凝水以及提高荧光捕获率,通常能提供更好的扩增结果和实验稳定性。
PCR管的分类:
1. 单管:适用于单个或少量样本的检测。
2. 8联管:最常用,操作便利,每个管有独立盖子。
3. 连盖8联管:每个管独立连盖,避免操作污染,方便加样。
4. 12联管:操作灵活,性价比优于8联管。
PCR管性能检测:
(1)渗漏密闭性:将n个PCR管加入半量墨汁,盖好盖子后放入水中,浸泡30min,没有墨汁渗出为合格。
(2)离心密闭性:将n个PCR管加入半量纯水,放入离心机,1000 rpm,30min,管盖未崩开未漏液为合格。
(3)热密闭性:将n个PCR管加入半量纯水,盖好盖子称重后放入PCR仪,设置一个常用的PCR程序,程序运行完毕后,再进行称重,PCR管未变形,管盖未崩开未漏液,前后重量未变化为合格。。
(4)冷密闭性:将n个PCR管加入半量纯水,放入-20℃冰箱,24h,离心管未变形,管盖未崩开未漏液为合格。
(5)污染物质检:将n个PCR管加入半量阴性纯水,盖好盖子涡旋1 min后静置5min,作为模板进行扩增,qPCR无扩增为合格。
(6)抑制物质检:将n个PCR管分别加入弱阳性质控物,室温静置5min,然后进行提取;RNA核酸,DNA核酸,室温静置5min,作为模板进行扩增,qPCR扩增未被抑制为合格。
(7)空白荧光通透性:对于qPCR,需要考察PCR管是否有非特异性荧光信号,将n个空PCR管,盖好盖子后放入PCR仪,设置一个常用的PCR程序,程序运行完毕后,qPCR无扩增为合格。
(8)阳性荧光通透性:对于qPCR,还需要考察PCR管是否会抑制荧光的通透性,将n个含弱阳性样品和扩增试剂的PCR管,与确认无荧光干扰的PCR管,盖好盖子后放入PCR仪一同扩增,设置一个常用的PCR程序,程序运行完毕后,qPCR扩增未被抑制为合格。