聚合酶链反应(PCR)产物是指通过特定的引物和酶在模板DNA上进行扩增的DNA片段。这种产物是特定的DNA序列的拷贝,通常由一对引物指导DNA聚合酶沿模板DNA合成。具有广泛的生物学应用价值,且其纯化和分析需要考虑多种因素以确保实验的准确性和可靠性。
目前主流的实时荧光定量PCR(QuantitativeReal-timePCR)方法分为染料法和探针法,染料法以SYBRGreen法为代表,SYBRGreen染料游离时荧光微弱,但但一旦与双链DNA结合后,荧光大大增强,反应管中的荧光强度与反应管中双链DNA的数量成正比例关系,因此荧光定量pcr实验步骤可以通过检测荧光计算反应管中产生的双链DNA(PCR产物)的量,但该方法没有特异性,非特异性扩增的产物也会被计入。
阈值循环数 Threshold cycle (Ct) 也写作Cq值,荧光信号大于荧光阈值时PCR循环数。仪器软件通常将第3-15个循环的荧光值设为基线(baseline),是由于测量的偶然误差引起的。阈值(threshold)一般是基线的标准偏差的10倍。在实际操作中也可以手动调节。高于阈值的荧光信号被认为是真实的信号,用于定义Ct值。Ct会受到阈值的影响,每次试验由于样品和仪器的不同会导致基线不同,进而影响阈值和Ct值。
血清是血液凝固析出的淡黄色透明液体,是血浆去除纤维蛋白后的混合物,主要成分包括蛋白质、氨基酸、糖类、维生素和多肽(如生长因子、胰岛 素、促生长激素)等。血清是细胞培养过程中重要的营养物质,同时也对细胞起到一定的保护作用。