酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。它是应用最多的一种免疫酶技术。
测任何目标蛋白的抗体不止一种,同一家抗体公司可能有好几种,甚至几十种。在不同的抗体公司,则更多。那么在眼花缭乱的抗体阵中,如何选择自己实验需要的抗体呢?选择适合实验的抗体需要综合考虑多个因素,包括实验类型、样本种属、抗体的特异性、宿主物种来源以及是否需要荧光标记等。
ELISA试剂盒中HRP底物范围较广,HRP即辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase)比活性高,稳定,分子量小,纯酶容易制备,所以最常用。过氧化物酶作为多个试剂盒显色体系的关键成分,对试剂盒的质量有重要影响。辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)的显色原理基于其酶催化作用(氧化作用)。HRP酶标二抗,即辣根过氧化物酶标记的二抗,是生物学实验常规用的二抗。其特点包括比活性高、稳定性好、分子量小、纯酶容易制备等,因此在免疫学实验中广泛应用。HRP底物主要包括二氨基联苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。