抗体(antibody,Ab)是机体在体内存在的外来分子、微生物等抗原物质刺激下,由B淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulins,Ig),主要分布在血清中,也分布于组织液及外分泌液中。抗体特异性鉴定是免疫化学技术中,确保抗原-抗体反应专一性的基础。从根本上验证特异性,投稿国际期刊,常常需要准备这方面数据。
蛋白质通过盐析的办法沉淀的原理是降低蛋白质的溶解度,使蛋白质凝聚而从溶液中析出。蛋白质的沉淀(protein precipitation),沉淀是溶液中的溶质由液相变成固相析出的过程。蛋白质从溶液中析出的现象,称为蛋白质的沉淀。蛋白质沉淀常用的方法有盐析、等电点沉淀、有机溶剂沉淀、生物碱试剂与某些酸沉淀等。
细胞转染是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展,转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中,其应用越来越广泛。
ELISA实验通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体干扰物质。因此,不严格的洗涤容易出现交叉污染或洗不干净背景高。 优化ELISA的重点之一在于洗涤,洗涤步骤可降低未结合抗体所引起的背景信号,从而增加分析的信噪比。每一步之间的洗涤确保只有特异的结合事件被保留,在最后一步产生信号。而不充分的洗涤会导致差异和高背景,从而带来不理想的结果。在做ELISA实验时,洗板有两种方法:手工法洗板 和 洗板机洗板。二者没有本质的差别,只要操作合乎要求,均能得到正确、可靠的结果。
ELISA酶联免疫吸附试验是目前临床上最常用的免疫学检验方法,由于其试剂稳定,易保存,操作简便,结果判断较客观,既适宜于大规模筛查试验,又可用于少量标本的检测,既可以做定性试验也可以做定量分析,目前已广泛用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子检测等领域。ELISA有敏感性高,特异性强,重复性好的特点,但其同时存在影响因素多的不足,现就实验操作中常见的影响因素进行分析实验,以提高的实验质量。