磷脂酶A2（phospholipase A2，PLA2）试剂盒说明书
微量法100T/48S
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
磷脂酶A2（EC3.1.1.4）是磷脂sn-2位脂酰基水解酶，广泛存在于动植物组织、细菌、细胞核分泌物中，参与脂肪消化，精子成熟、细胞信号传递、脂质过氧化修复、宿主反应等生理过程，在控制体内磷脂类物质平衡、调节机体新陈代谢、参与疾病的病理进程等方面发挥着及其重要的作用。
测定原理
磷脂酶A2作用于2-硫代十六酰乙基磷酸胆碱（HEPC）产生游离巯基，与DTNB反应生成黄色物质，在412nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、超速冷冻离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。
试剂组成和配制
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体×5瓶，-20℃避光保存。临用前根据用量每瓶加入1.8mL试剂二充分混匀；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
样品处理
测定操作
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对照管 |
测定管 |
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样品（μL） |
20 |
20 |
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试剂二（μL） |
180 |
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试剂三（μL） |
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180 |
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充分混匀，37℃反应10min，于微量石英比色皿/96孔板，蒸馏水调零，测定412nm处吸光值，记为A对照管和A测定管，△A=A测定管- A对照管 |
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计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（
×d）×V反总÷（V样×Cpr）÷T
= 73.53×△A÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：每克组织每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2活性（nmol/min/g 鲜重）= △A÷（
×d）×V反总÷（W×V样÷V样总）÷T
= 73.53×△A÷W
3. 细胞数量计算
酶活性定义：每104个细胞每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2活性（nmol/min/104 cell）= △A÷（
×d）×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）÷T
= 73.53×△A÷细胞数量
4按照液体体积计算
酶活性定义：每毫升血清每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2活性（nmol/min/mL）= △A÷（
×d）×V反总÷V样÷T
= 73.53×△A
：TNB消光系数，13600L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，1mL；V样：反应体系中加入样本体积，0.1mL；W：样本质量，g；V样总：加入提取液体积，1mL；
T：反应时间，10min
b. 用96孔板测定的计算公式如下
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2活性（nmol/min/mg prot）= △A÷（
×d）×V反总÷（V样×Cpr）÷T
=147.06×△A÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：每克组织每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2活性（nmol/min/g 鲜重）= △A÷（
×d）×V反总÷（W×V样÷V样总）÷T
= 147.06×△A÷W
3. 细胞数量计算
酶活性定义：每104个细胞每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2活性（nmol/min/104 cell）= △A÷（
×d）×V反总÷（V样×细胞数量÷V样总）÷T
=147.06×△A÷细胞数量
4按照液体体积计算
酶活性定义：每毫升血清每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。
PLA2活性（nmol/min/mL）= △A÷（
×d）×V反总÷V样÷T
= 147.06×△A
：TNB消光系数，13600L/mol/cm；d：比色皿光径，0.5cm；V反总：反应总体积，1mL；V样：反应体系中加入样本体积，0.1mL；W：样本质量，g；V样总：加入提取液体积，1mL；
T：反应时间，10min
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资料/datasheet
